De Logu Anticorpi in terapia

Question 1

perché gli ab murini hanno uso limitato nell’uomo

Answer 1

inefficienza di funzioni effettrici (ridotta capacità di legare il complemento), immunogenicità e induzione di una risposta HAMA human anti mouse antibodies, breve emivita per bassa affinità con il recettore FcRn

Question 2

tipi di anticorpi ingegnerizzati

Answer 2

chimerici (porzioni costanti sono umane), umanizzati (solo il CDR è murino), completamente umani

Question 3

anticorpi umanizzati

Answer 3

come nella produzione di anticorpi murini si analizza la sequenza dell’anticorpo selezionato e si amplificano i domini della CDR, che in seguito vengono inseriti in porzioni corrispondenti ai CDR umani tramite una procedura detta CDR grafting

Question 4

come si producono anticorpi umani

Answer 4

due modi: 1) animali transgenici knock out per catena pensante e leggera di una IgG che si riproducono con topi knockin per sequenze di IgG umane. si formano topi che producono IgG completamente umane. 2) phage display: geni VH e VL umani uniti da DNA linker sono clonati sotto forma di cDNA nel genoma di un Fago ed espressi sulla sua superficie. si ottengono librerie di ab che possono essere screenati. antigene assorbito su sfere magnetiche in piastra, i fagi che si legano vengono selezionati, amplificati e analizzati. con mutagenesi sito specifica si può migliorare l’affinità di legame. in seguito, queste porzioni variabili vengono fuse con porzioni costante di una IgG umana.

Question 5

peso molecolare catene anticorpi

Answer 5

catene pesanti H 50 kDa ciascuna, catene leggere L 25 kDa ciascuna, tot 150 kDa. gli ab dei camelidi HCAbs sono 80 kDa totale

Question 6

anticorpi dei camelidi

Answer 6

HCAbs heavy chain only antibodies conosciuti anche come nano bodies o VHHs. sono omodimeri di catene pesanti che mancano del dominio CH1 e hanno un peso di 80 kDa. porzioni variabili hanno forme non canoniche di CDR (leggermente più grandi). vantaggi alta termostabilità e solubilità, piccola dimensione quindi ingegneria rapida e a basso costo, rapida diffusione tessutale, bassa immunizzazione. utilizzati per epitopi di dimensioni ridotte difficili da essere captati.

Question 7

vari formati di anticorpi ingegnerizzati

Answer 7

-Anticorpi interi
- Frammenti anticorpali
- Anticorpi bispecifici
- Anticorpi coniugati a piccole molecole
- Anticorpi coniugati a proteine
- Anticorpi intracellulari

Question 8

tipi di anticorpi interi

Answer 8

classici o quelli di camelidi

Question 9

tipi di frammenti anticorpi

Answer 9

frammenti naturali o ricombinanti. tra i ricombinanti ci sono i scFv, i diabody e i Nanobody.

Question 10

prima e seconda generazione di Ab bispecifici

Answer 10

Prima generazione: quadromi, fusione di due ibridami murini e Triomab, fusione di un ibridoma di topo e uno di ratto. Seconda generazione: dimessi di IgG1 e 2 con mutazioni nei domini di collegamento per prevenire la dimerizzazione tra dimessi uguale. formati tramite la tecnica chiamata knobs into holes. esempio ab bispecifico prodotto dalla Lilly che lega sia il recettore CGRP che la struttura RAMP per curare l’emicrania

Question 11

BITE anticorpi

Answer 11

bispecific T cell engagers, usati spesso come frammenti anticorpali. legano CD3 per legare il linfocita T e un antigene tumorale come CD19 nei linfomi. indirizza la risposta citotossica mediata dai T. legame tra linfocita e cellula tumorale è la sinapsi citolitica.

Question 12

anticorpi coniugati a farmaci

Answer 12

l’Ab lega verso un recettore e avviene l’internalizzazione del complesso Ab-farmaco tramite endocitosi, in seguito l’endosoma si fonde con il lisosoma in un ambiente acido. il liker tra farmaco e Ab erano idrazonici, cioè gruppi stabili a ph neutro ma idrolizzati a ph 5. si riesce ad attaccare fino a 8 molecole di farmaco per ogni ab.

Question 13

anticorpi a caricamento indiretto o pretargeting

Answer 13

anticorpo coniugato ad un enzima che catalizza la trasformazione di una sostanza e poi la somministrazione di un profarmaco che viene attivato da un enzima. si chiama ADEPT antibody directed enzyme prodrug therapy

Question 13

anticorpi a caricamento indiretto o pretargeting

Answer 13

anticorpo coniugato ad un enzima che catalizza la trasformazione di una sostanza e poi la somministrazione di un profarmaco che viene attivato da un enzima. si chiama ADEPT antibody directed enzyme prodrug therapy

Question 14

ADEPT antibody directed enzyme prodrug therapy

Answer 14

anticorpo coniugato ad un enzima che catalizza la trasformazione di una sostanza e poi la somministrazione di un profarmaco che viene attivato da un enzima. è un tipo di anticorpo a caricamento indiretto

Question 15

anticorpi coniugati a proteine: tre tipi

Answer 15

immunotossine, immunocitochine, TAA tumor associated antigens

Question 16

immunotossine

Answer 16

anticorpi coniugati a proteine. proteine con scFv legato a una tossina, come quella difterica. l’esotossina ha 3 domini: dominio di binding per legare recettori espressi sull’epitelio respiratorio, dominio T di traslocazione dall’endosoma al citoplasma, dominio di attivazione che inibisce il fattore di allungamento EF2 coinvolto nella sintesi proteica

Question 17

immunocitochine

Answer 17

anticorpi coniugati a proteine. frammenti anticorpali collegati a citochine per la terapia tumorale, sono necessarie dosi elevate a causa della breve emivita

Question 18

TAA tumor associated antigens

Answer 18

anticorpi coniugati a proteine. sono mirati contro antigeni tumorali e coniugati con una tossina.

Question 19

CAR chimeric antigen receptor

Answer 19

linfociti T geneticamente modificati per esprimere un frammento ScFv diretto verso un antigene tumorale collegato alla porzione intracellulare del recettore CD3. in questo modo il linfo T lega l’antigene intracellulare e si attiva la via di trasduzione del CD3 mediando azione citotossica verso il tumore.

Question 20

modalità con cui gli anticorpi possono agire nella terapia antitumorali (2 modalità)

Answer 20

azione diretta e indiretta. con la diretta l’Ab lega molecole coinvolte nella traduzione del segnale o recettori, impedisce il legame con il ligando o blocca la dimerizzazione recettoriale, con conseguente blocco del ciclo cellulare, induzione di apoptosi. indiretta favorisce l’attivazione del sistema immunitario, perché il frammento Fc dell’anticorpo può attivare la CDC complente dependent cytotoxicity o la ADCC antibody dependent cell mediated cytotoxicity.

Question 21

cause degli effetti avversi degli anticorpi in terapia

Answer 21

meccanismo di azione farmacologica del prodotto, espressione del bersaglio in tessuti diversi, interazione con un antigene diverso rispetto al bersaglio, sviluppo di una risposta immunitaria per anticorpi neutralizzanti che riducono l’efficacia del farmaco o reazioni di ipersensibilità dovute all’immunogenicità del prodotto

Question 22

esempi di effetti avversi dovuti all’uso di anticorpi in terapia

Answer 22

1) TLS sindrome da lisi tumorale, infezioni (infliximab con mycobacterium tubercolosi, natalizumab e casi di leucoencefalopatia multifocale progressiva dovuta a riattivazioni del virus di John Cunningham, 2) tumori come infliximab e tumore alla cervice uterina, 3) inibizione angiogenesi come bevacizumab e aumento di effetti trombociti, 4) eventi avversi di tipo immunologico come anti-drugs antibodies

Question 23

effetti collaterali utilizzo di infliximab

Answer 23

è un anticorpo anti TNF alfa e può causare riattivazione di infezioni latenti di Mycobacterium tubercolosi. opportuno fare test cutaneo della tubercolina e vedere produzione di IFN gamma in seguito all’esposizione dei linfo T con gli antigeni del patogeno. inoltre, donne trattate con questo ab hanno mostrato aumentata incidenza del tumore alla cervice uterina

Question 24

effetti collaterali di natalizumab

Answer 24

ab utilizzato per malattie autoimmuni, impedisce la migrazione dei leucociti dal circolo alla sede di infiammazione. lega l’integrina VLA4 (o alfa4 beta1) presente sulla superficie del linfocita, impedendo al linfocita di fare extravasazione e di venire attivato dalle APC. se l’ab lega le integrino sulle cellule ematopoietiche dove è latente il DNA virale di JCV, queste cellule si differenziano ed è favorita la replicazione del virus.

Question 25

effetti collaterali di bevacizumab

Answer 25

ab anti VEGF che blocca la neoangiogenesi tumorale. collegato a eventi tromboembolici in pazienti trattati perché VEGF serve anche nel processo di rigenerazione dei vasi sanguigni

Question 26

cause di immunogenicità degli anticorpi in terapia e della formazione di anti-drugs antibodies

Answer 26

1) Caratteristiche del composto, qualita, presenza di impurezze, corretto ripiegamento della proteina, processo di produzione, molecole uguali ma prodotte a partire da fonti diverse o in siti diversi (essendo la produzione su cellule, è difficile mantenere la comparabilita tra lotti)
2) Modalità di somministrazione durata del trattamento (brevi e continuati sono meno immunogenici degli intermittenti), endovena è meno immunogenica rispetto a intramuscolo e sottocute
3) Variabilità individuale del paziente predisposizione genetica dovuta a polimorfismi di MHC e citochine, stato patologico alterato e la presenza di terapie concomitanti