Cytométrie de flux - Dre Turcotte (AR) Flashcards
Nommer trois applications de la cytométrie en flux
immunophénotypage
ploïdie
maladie résiduelle
hémoglobinurie paroxystique nocturne
3 paramètres pouvant être évalués par la cytométrie en flux
taille des cellules
granularité
immuno
qu’est-ce que le forward scatter donne comme info
taille des cellules
qu’est-ce que le side scatter donne comme info
complexité/granularité du cytoplasme
la technique de cytométrie en flux permet d’utiliser plusieurs anticorps sur une même cellule pour connaître son immunophénotype. Ceci entraîne cependant un chauvauchement dans les signaux émis par les fluochromes.
Qu’est-ce qui doit être fait pour contrer cet effet?
compensation (faite par le logiciel)
Quelle image visualisée sur le nuage de points doit nous faire penser à une compensation inadéquate?
image en pointe
Nommer deux mesures (actions) de contrôle qualité en cytométrie de flux
évaluation de l’intensité de fluorescence et du coefficient de variation (en utilisant des particules qui ont une fluorescence stable et modérée)
évaluation du bruit de fond avec des particules non-fluorescentes
Quels spécimens peuvent être utilisés pour la cytométrie en flux
tout spécimen à l’état frais duquel on peut obtenir une suspension de cellules :
ponction de liquide
sang
ponction de MO
tissu solide comme ganglion
etc
Dans quel(s) milieu(x) doivent être mis les échantillons pour la cytométrie de flux?
sang et MO : tube avec anticoagulant
tissu solide : milieu de culture RPMI
Quels genres de résultats de cytométrie de flux nous indiquent qu’on a une population néoplasique (4)?
- gain d’antigène non-exprimé normalement par cette lignée
- niveau d’Expression anormalement faible ou élevé, ou perte
- expression asynchrone
- expression anormalement homogène
Quel est site de maturation des lymphocytes B
moelle osseuse
QUel est le site de maturation des lymphocytes T
thymus
Quels paramètres nous permettent de sélectionner la population de lymphocytes
CD45+
side scatter : peu ou pas granulaire
forward scatter : petite taille
quel antigène permet d’identifier la population de plasmocytes
CD38
Quels antigènes permettent d’identifier la population de lymphocytes B
CD20
CD19
CD22
Quels antigènes permettent d’identifier la population T
CD3
CD4, CD8
Quel est le profil suggestif d’un lymphome folliculaire
CD20+, CD19+ (population B)
lambda OU kappa + (population monoclonale = anormal)
CD10+ (+ dans le lymphome folliculaire)
CD5-, CD43-, CD23-, CD38- (DDx autres lymphomes B matures)
Quels marqueurs sont suggestis d’une population B polyclonale (ex hyperplasie folliculaire réactionnelle)
présence des chaînes légères lambda ET kappa
Quel est le profil attendu dans un lymphome de Hodgkin en cytométrie de flux? Expliquer brièvement.
absence d’anomalie (absence de population monoclonale)
parce que la proprotion de cellules tumorales dans le lymphome de Hodgkin est très faible donc on ne la détecte pas
Vous observez une image de “botte” sur le graphique CD45 x side scatter et 2 “bosses” sur le graphique CD19 x CD20. Quel est le diagnostic le plus probable?
LLC/SLL
Quel est le profil immuno de la leucémie lymphoïde chronique / lymphome lymphocytique à petites cellules B
marqueurs B : CD19+
CD20 diminué, CD45 dim, CD38 dim
clonalité des chaînes légères (dim), lambda ou kappa
CD23+
expression aberrante de CD5+
CD200+
Quel est l’aspect de maturation normale de la moelle osseuse sur le graphique
a) CD13 x CD14
b) CD34 x CD117
a) CD13 x CD14 forme une boucle
b) CD34 x CD117 forme un hippocampe
Nommer les marqueurs d’immaturité des blastes myéloïdes
CD34
CD117
Nommer les marqueurs d’immaturité des blastes lymphoïdes
TdT
Nommer les marqueurs myéloïdes
CD13
CD15
CD33
MPO
Nommer les marqueurs monocytaires
CD4
CD14
CD33 fort
CD64
CD11b
CD68
CD36
lysozyme
Nommer les marqueurs lymphoïdes B
CD19, CD22, CD79a
Nommer les marqueurs lymphoïdes T
CD2
CD3 (s et c)
CD5
CD7
Nommer les marqueurs positifs dans les lymphoblastes de la LLA-B
- marqueurs B : CD19, CD79a, CD22
- CD10
- CD24
- TdT (= immaturité/blastes)
(peut aussi exprimer les marqueurs myéloïdes CD13 et CD33)
Nommer les marqueurs positifs dans la LLA-T
marqueurs T : CD3 cytoplamique (spécifique), CD4, CD8, CD5, CD7, CD1a
TdT (immaturité)
CD10 peut être +
Quel est le profil attendu dans la leucémie aigüe monocytaire et monoblastique
marqueurs d’immaturité : CD117 + souvent que CD34
expression variable de : CD13, CD33, CD15, CD65, MPO
au moins deux marqueurs monocytaires : CD14, CD4, CD11b, CD11c, CD64, CD68, CD36, lysozyme
expression aberrante de CD56 et/ou CD7 dans 25-40%
souvent HLA-DR +
