cours 9 (final) Flashcards
comment détecter des bactéries?
coloration de Gram et paroi bactérienne:
* mise au point en 1884 par Hans Christian Gram
* pour détecter les bactéries sur du tissu eucaryote infecté
* a permis de scinder les bactéries en 2 grands groupes
* selon la nature de leur paroi
* reflète aussi d’autres propriétés bactériennes
toujours utilisé universellement dans les labos de bactériologie
À quoi peuvent nuire les bactéries pathogènes?
- à la santé humaine
- aux animaux et aux plantes domesAques
- à l’environnement de façon générale
Quelles sont les comparaison/différences entre les bactéries et les cellules eucaryotes?
- les bactéries sont beaucoup + peAtes
- sans noyau
Þ très difficiles à détecter - mais seules les bactéries possèdent du pepAdoglycane (dans paroi)
Quelles sont les Ă©tapes de la coloration de Gram?
1) étale un prélèvement sur lame de verre
2) sèche pour le fixer à la lame
3) applique 1er colorant: violet cristal
4) mordant (solution diluée d’iode) Þ
forme complexe violet cristal-iode
5) déshydrate et décolore avec
éthanol ou acétone
6) rince à l’eau
7) applique 2e colorant: safranine ou fuchsine
8) rince, sèche, observe au microscope
Þ le résultat obtenu diffère selon les bactéries présentes
Quels sont les 2 typoes de bactéries detectés par la coloration de Gram?
bactéries colorées en violet :
= Gram posi=ves = Gram +
paroi de peptidoglycane seul
(sans membrane externe)
bactéries colorées en rose:
= Gram négatives = Gram -
paroi de peptidoglycane + membrane externe
selon l’origine du prélèvement,
il pourrait n’y avoir que des bactéries Gram + ou que des bactéries Gram –; il pourrait y avoir les 2 types
bactériens, ou aucun s’il n’y a pas d’infection bactérienne ou si l’infection est aux mycoplasmes (sans paroi)
Quelles sont les caractéristiques des bactéries coloré violet dans la coloration de Gram?
- paroi = pepAdoglycane seul, Ă©pais
- polymères de monosaccharides aminés
en nombre Ă©gal et en alternance:
-NAM-NAG-NAM-NAG- par liens glycosid. - acide N-aétylmuramique
- N-acétylglucosamine
- tétrapepAdes aVachés aux NAM
- et entre eux par ponts 5-GLY
- traversé par des molécules d’
- acide lipotéichoïque traversent tout le
pepEdoglycane et ancrées dans le feuillet
externe de la membrane plasmique - acide téichoïque moins longues et pas
ancrées dans la membrane plasmique - relié à mb plasmique par lipoprotéines
comment les bactéries se colorent en violet?
- bactéries colorées en violet
- paroi Ă©paisse mais poreuse
Ăž le violet cristal passe et colore le
cytoplasme (ribosomes) et, surtout, le
peptidoglycane - l’éthanol déshydrate la paroi
Ăž la paroi rapetisse = dense
Ăž emprisonne le colorant violet
Þ la ¢ reste colorée en violet - le 2e colorant ne peut plus pénétrer
Quelles sont les caractéristiques des bactéries colorées rose dans la coloration de Gram?
- paroi = a) pepAdoglycane
- mince
- polymères de monosaccharides aminés:
-NAM-NAG-NAM-NAG- - tétrapepEdes aGachés aux NAM
- pas traversé par des molécules d’acide
lipotéichoïque ou téichoïque - paroi = b) membrane externe
- feuillet interne = phosphoglycérolipides
- feuillet externe = lipopolysaccharides (LPS)
- des lipoprotéines relient le feuillet
interne de la membrane externe au
pepAdoglycane
Comment les bactéries se colorent rose?
- bactéries colorées en rose
- le violet cristal passe et colore les
ribosomes et le peptidoglycane - l’éthanol ou l’acétone servant à la
déshydratation dissout la membrane
externe - le peptidoglycane est trop mince pour
emprisonner le violet cristal
Þ le violet est éliminé au rinçage qui suit
la déshydratation - le 2e colorant (safranine ou fuchsine) le
colore en rose
Qu’est-ce qu’un antibiotique?
- agents chimiothérapeutiques capables de tuer les micro-organismes ou d’en inhiber la croissance
- ils doivent tirer profit des différences structurales et métaboliques entre les ¢ procaryotes et les ¢ eucaryotes
- sinon, les ¢ eucaryotes infectées seraient aussi affectées, ce qu’il ne faut pas
*principaux traits des bactéries que les ¢ eucaryotes n’ont pas? - peptidoglycane
- ribosomes de 70S (¢ eucaryotes ont ribosomes 80S)
- sinon, les ¢ eucaryotes infectées seraient aussi affectées, ce qu’il ne faut pas
- certains antibiotiques aVaquent le
peptidoglycane de la paroi - d’autres aVaquent l’intérieur de la bactérie
- la synthèse protéique via les ribosomes
- ailleurs (pas étudiées dans ce cours)
Þ les fonctions de la bactérie sont affectées
Est-ce que les antibiotiques et les antimicrobiens sont la meme chose?
non,
* les antimicrobiens sont aussi capables de tuer les microorganismes ou d’en inhiber la croissance
* mais ils affectent également les ¢ eucaryotes Þ
* ne peuvent être administrés à un animal
* servent d’agents de décontamination des objets
nomme les deux mode de fonction des antibiotiques et les sous-types
antibiotiques sur paroi:
1. lysozyme
2. pénicilline
3. vancomycine
4. mycoplasmes?
antibiotique sur synthèse protéique:
1. ribosome (70s)
-petite sous-unité ribosomale
- grosse sous-unité ribosomale
comment à été découvert les antibiotiques sur paroi: le lysozyme?
- enzyme glycolytique dans la salive, les larmes, le lait
maternel, le blanc d’oeuf = antibiotique naturel - découvert en 1922 par Alexander Fleming (1881-1955)
on realise sur les milieux de culture, on peut inhiber la croissance de certaines bactéries par la salive et le blanc d’oeuf
Comment fonctionnent les antibiotiques sur paroi: le lysozyme?
coupe (hydrolyse) les liens glycosidiques
entre NAM et NAG du peptidoglycane
Þ peptidoglycane se désintègre, la ¢ meurt
* elle n’est plus protégée contre l’hypotonicité du milieu
comment à été découvert les antibiotiques sur paroi: la péniciline?
- découverte par Fleming* en 1928
- toxine Ă©mise par le champignon
microscopique Penicillium notatum
Ăž moisissure sur le pain, etc.
Comment fonctionnent les antibiotiques sur paroi: la péniciline?
empĂŞche la formation des ponts 5-Gly du peptidoglycane:
- empêche la liaison des ponts de pentaglycine (5-Gly) avec les tétrapeptides attachés aux NAM
- inhibe (par compétition) la transpeptidase qui catalyse la liaison du pont 5-Gly à l’a.a. D-alanine du tétrapeptide
- le pep=doglycane sans ponts 5-Gly est affaibli
Þ les bactéries ne résistent pas au choc osmotique d’un milieu hypotonique et meurent
Qu’est-ce qu’un transpeptidase?
famille d’enzymes qui
catalysent des liaisons peptidiques; il
existe des transpeptidases spécifiques
aux liaisons entre les différents peptides
Quells est la molécule de la pénicilline?
l’acide 6-aminopénicillanique
nomme des mariantes naturelles de la pénicilline
- pénicilline G
(administrée par injection i.v. ou i.m.) - pénicilline V
(administrée oralement)
Nomme des variantes semi-synthétiques de la pénicilline
- ampicilline
- carbénicilline
- méticilline
- ticarcilline
Comment les varaintes de la pénicilline peuvent être utiles?
- certaines bactéries produisent
la β-lactamase (pénicillinase)
Þ elles résistent à la pénicilline - la méticilline* contrecarre la
β-lactamase… mais … - certaines bactéries lui résistent
- Tygacil (tigécycline)
- = médicament contre SARM
- agit comme la tétracycline
donne un exemple de bactéries à β-lactamase (pénicillinase) résistante à la pénicilline et d’une bactérie resistante à la méticilline
Ex1: Streptomyces albus (Gram +) qui attaque
les plantes herbacées (dont se nourrissent
plusieurs animaux sauvages et domestiques)
- ex2. Staphylococcus aureus résistant
à la méticilline (SARM)
Comment fonctionnent les antibiotiques sur paroi: 3-vancomycine?
- glycopeptide hydrophile à haut poids moléculaire
- se lie par liaison H à l’extrémité
D-alanine du tétrapep=de
Ăž empĂŞche les liaisons directes et 5-Gly
entre tétrapepAdes
Ăž affecte le pepAdoglycane de la paroi
En quoi la colloration de Gram est utile dans le choix de l’antibiotique à utiliser?
- les bactéries Gram – résistent mieux aux an=bio=ques qui
agissent sur le pep=doglycane de la paroi - la membrane externe offre une certaine
barrière à la pénétraAon - du lysozyme
- de la vancomycine
- car molécules trop grosses pour la traverser
Ăž ces anAbioAques servent
contre les bactéries Gram +
\ uElité de la coloraEon de
Gram pour déterminer quel
type d’anEbioEque uEliser, ou
du moins lequel ne pas uEliser