cours 9 (final) Flashcards
comment détecter des bactéries?
coloration de Gram et paroi bactérienne:
* mise au point en 1884 par Hans Christian Gram
* pour détecter les bactéries sur du tissu eucaryote infecté
* a permis de scinder les bactéries en 2 grands groupes
* selon la nature de leur paroi
* reflète aussi d’autres propriétés bactériennes
toujours utilisé universellement dans les labos de bactériologie
À quoi peuvent nuire les bactéries pathogènes?
- à la santé humaine
- aux animaux et aux plantes domesAques
- à l’environnement de façon générale
Quelles sont les comparaison/différences entre les bactéries et les cellules eucaryotes?
- les bactéries sont beaucoup + peAtes
- sans noyau
Þ très difficiles à détecter - mais seules les bactéries possèdent du pepAdoglycane (dans paroi)
Quelles sont les étapes de la coloration de Gram?
1) étale un prélèvement sur lame de verre
2) sèche pour le fixer à la lame
3) applique 1er colorant: violet cristal
4) mordant (solution diluée d’iode) Þ
forme complexe violet cristal-iode
5) déshydrate et décolore avec
éthanol ou acétone
6) rince à l’eau
7) applique 2e colorant: safranine ou fuchsine
8) rince, sèche, observe au microscope
Þ le résultat obtenu diffère selon les bactéries présentes
Quels sont les 2 typoes de bactéries detectés par la coloration de Gram?
bactéries colorées en violet :
= Gram posi=ves = Gram +
paroi de peptidoglycane seul
(sans membrane externe)
bactéries colorées en rose:
= Gram négatives = Gram -
paroi de peptidoglycane + membrane externe
selon l’origine du prélèvement,
il pourrait n’y avoir que des bactéries Gram + ou que des bactéries Gram –; il pourrait y avoir les 2 types
bactériens, ou aucun s’il n’y a pas d’infection bactérienne ou si l’infection est aux mycoplasmes (sans paroi)
Quelles sont les caractéristiques des bactéries coloré violet dans la coloration de Gram?
- paroi = pepAdoglycane seul, épais
- polymères de monosaccharides aminés
en nombre égal et en alternance:
-NAM-NAG-NAM-NAG- par liens glycosid. - acide N-aétylmuramique
- N-acétylglucosamine
- tétrapepAdes aVachés aux NAM
- et entre eux par ponts 5-GLY
- traversé par des molécules d’
- acide lipotéichoïque traversent tout le
pepEdoglycane et ancrées dans le feuillet
externe de la membrane plasmique - acide téichoïque moins longues et pas
ancrées dans la membrane plasmique - relié à mb plasmique par lipoprotéines
comment les bactéries se colorent en violet?
- bactéries colorées en violet
- paroi épaisse mais poreuse
Þ le violet cristal passe et colore le
cytoplasme (ribosomes) et, surtout, le
peptidoglycane - l’éthanol déshydrate la paroi
Þ la paroi rapetisse = dense
Þ emprisonne le colorant violet
Þ la ¢ reste colorée en violet - le 2e colorant ne peut plus pénétrer
Quelles sont les caractéristiques des bactéries colorées rose dans la coloration de Gram?
- paroi = a) pepAdoglycane
- mince
- polymères de monosaccharides aminés:
-NAM-NAG-NAM-NAG- - tétrapepEdes aGachés aux NAM
- pas traversé par des molécules d’acide
lipotéichoïque ou téichoïque - paroi = b) membrane externe
- feuillet interne = phosphoglycérolipides
- feuillet externe = lipopolysaccharides (LPS)
- des lipoprotéines relient le feuillet
interne de la membrane externe au
pepAdoglycane
Comment les bactéries se colorent rose?
- bactéries colorées en rose
- le violet cristal passe et colore les
ribosomes et le peptidoglycane - l’éthanol ou l’acétone servant à la
déshydratation dissout la membrane
externe - le peptidoglycane est trop mince pour
emprisonner le violet cristal
Þ le violet est éliminé au rinçage qui suit
la déshydratation - le 2e colorant (safranine ou fuchsine) le
colore en rose
Qu’est-ce qu’un antibiotique?
- agents chimiothérapeutiques capables de tuer les micro-organismes ou d’en inhiber la croissance
- ils doivent tirer profit des différences structurales et métaboliques entre les ¢ procaryotes et les ¢ eucaryotes
- sinon, les ¢ eucaryotes infectées seraient aussi affectées, ce qu’il ne faut pas
*principaux traits des bactéries que les ¢ eucaryotes n’ont pas? - peptidoglycane
- ribosomes de 70S (¢ eucaryotes ont ribosomes 80S)
- sinon, les ¢ eucaryotes infectées seraient aussi affectées, ce qu’il ne faut pas
- certains antibiotiques aVaquent le
peptidoglycane de la paroi - d’autres aVaquent l’intérieur de la bactérie
- la synthèse protéique via les ribosomes
- ailleurs (pas étudiées dans ce cours)
Þ les fonctions de la bactérie sont affectées
Est-ce que les antibiotiques et les antimicrobiens sont la meme chose?
non,
* les antimicrobiens sont aussi capables de tuer les microorganismes ou d’en inhiber la croissance
* mais ils affectent également les ¢ eucaryotes Þ
* ne peuvent être administrés à un animal
* servent d’agents de décontamination des objets
nomme les deux mode de fonction des antibiotiques et les sous-types
antibiotiques sur paroi:
1. lysozyme
2. pénicilline
3. vancomycine
4. mycoplasmes?
antibiotique sur synthèse protéique:
1. ribosome (70s)
-petite sous-unité ribosomale
- grosse sous-unité ribosomale
comment à été découvert les antibiotiques sur paroi: le lysozyme?
- enzyme glycolytique dans la salive, les larmes, le lait
maternel, le blanc d’oeuf = antibiotique naturel - découvert en 1922 par Alexander Fleming (1881-1955)
on realise sur les milieux de culture, on peut inhiber la croissance de certaines bactéries par la salive et le blanc d’oeuf
Comment fonctionnent les antibiotiques sur paroi: le lysozyme?
coupe (hydrolyse) les liens glycosidiques
entre NAM et NAG du peptidoglycane
Þ peptidoglycane se désintègre, la ¢ meurt
* elle n’est plus protégée contre l’hypotonicité du milieu
comment à été découvert les antibiotiques sur paroi: la péniciline?
- découverte par Fleming* en 1928
- toxine émise par le champignon
microscopique Penicillium notatum
Þ moisissure sur le pain, etc.
Comment fonctionnent les antibiotiques sur paroi: la péniciline?
empêche la formation des ponts 5-Gly du peptidoglycane:
- empêche la liaison des ponts de pentaglycine (5-Gly) avec les tétrapeptides attachés aux NAM
- inhibe (par compétition) la transpeptidase qui catalyse la liaison du pont 5-Gly à l’a.a. D-alanine du tétrapeptide
- le pep=doglycane sans ponts 5-Gly est affaibli
Þ les bactéries ne résistent pas au choc osmotique d’un milieu hypotonique et meurent
Qu’est-ce qu’un transpeptidase?
famille d’enzymes qui
catalysent des liaisons peptidiques; il
existe des transpeptidases spécifiques
aux liaisons entre les différents peptides
Quells est la molécule de la pénicilline?
l’acide 6-aminopénicillanique
nomme des mariantes naturelles de la pénicilline
- pénicilline G
(administrée par injection i.v. ou i.m.) - pénicilline V
(administrée oralement)
Nomme des variantes semi-synthétiques de la pénicilline
- ampicilline
- carbénicilline
- méticilline
- ticarcilline
Comment les varaintes de la pénicilline peuvent être utiles?
- certaines bactéries produisent
la β-lactamase (pénicillinase)
Þ elles résistent à la pénicilline - la méticilline* contrecarre la
β-lactamase… mais … - certaines bactéries lui résistent
- Tygacil (tigécycline)
- = médicament contre SARM
- agit comme la tétracycline
donne un exemple de bactéries à β-lactamase (pénicillinase) résistante à la pénicilline et d’une bactérie resistante à la méticilline
Ex1: Streptomyces albus (Gram +) qui attaque
les plantes herbacées (dont se nourrissent
plusieurs animaux sauvages et domestiques)
- ex2. Staphylococcus aureus résistant
à la méticilline (SARM)
Comment fonctionnent les antibiotiques sur paroi: 3-vancomycine?
- glycopeptide hydrophile à haut poids moléculaire
- se lie par liaison H à l’extrémité
D-alanine du tétrapep=de
Þ empêche les liaisons directes et 5-Gly
entre tétrapepAdes
Þ affecte le pepAdoglycane de la paroi
En quoi la colloration de Gram est utile dans le choix de l’antibiotique à utiliser?
- les bactéries Gram – résistent mieux aux an=bio=ques qui
agissent sur le pep=doglycane de la paroi - la membrane externe offre une certaine
barrière à la pénétraAon - du lysozyme
- de la vancomycine
- car molécules trop grosses pour la traverser
Þ ces anAbioAques servent
contre les bactéries Gram +
\ uElité de la coloraEon de
Gram pour déterminer quel
type d’anEbioEque uEliser, ou
du moins lequel ne pas uEliser