Cours 8 Flashcards
Quelles sont les précautions à prendre lorsqu’on fait une isolatrion d’ARN (7)
- matériel rnas free
- utilisation de plastique jetable
- verrerie 180deg x 8h
- traitement depc: 0.1%, 2h à 37 deg, autoclave
- rnase away
- espace réservé
- gants
Quelles sont les étapes de l’isolation d’arn
- récolte
- lyse (thiyanate de guanidium et phénol)
- extraction (chloroforme)
- enlever la phase aqueuse (du haut)
- Précipiter et décanter
- ajouter de l’eau
Comment peut-on analyser (techniques) l’arn?
- Électrophorèse
- spectrophotomètre
- fluorescence
- radioactivité
- biotine/digoxigénine
- bioanalyzer
Quelles sont les étapes de l’hybridation nothern?
- extraction arn
- électrophorèse (10ug)
- transfert sur membrane
- hybridation
- révélation
Quantification de l’arn avec nothern (3)?
- déterminer l’abondance
- mesurer l’expression
- comparer l’expression
Quelles est la particularité de la protection à la rnase lors d’une détection d’arnm?
l’hybridation de la sonde à l’arnm confère un protection lors de la digestion à la rnase. Donc tout l’arn sera digéré sauf celui hybridé.
Quelle est la différence entre un RT à une ou à deux étapes?
1 étape: amorce spécifiques
2 étape: amorces aléatoires + PCR
Combien de pb?
A) sRNA
B) iRNA
A) 50-500 pb
B) 21 pb
Que fait RISC?
Lie iRNA et scanne l’adn jusqu’à ce qu’il y ait reconnaissance de séquence, puis dégradation
CRISPR: combien de pb / gène A) séquence répétées B) séquences uniques C) Cas D) Leader
A) 24-47 pb
B) 22-72 pb
C) 6-20 gènes
D) 550 pb (max)
Vrai ou faux. La séquence leader est riche en AT?
Yup
Dans CRISPR, Qu'est ce que: A) Cas9 B) crARN C) tracrRNA D) PAM
A) enzyme (endo, exo, hélicase..)
B) cible
D) guide
E) coupure (NGG), protospacer
Quels sont les problèmes de crispr?
- coupure hors cible
- gene drive
- OGM
- éthique chez l’humain
