Cours 6 - Fin Intra Flashcards
Compagnie la plus reconnue pour la distribution d’enzymes de restriction?
New england biolabs
Site sur les meilleures conditions possible pour la digestion d’adn avc 2 enzymes simultanément?
Double digest finder
Comment s’assurer de l’efficacité des digestions?
Contrôle de digestion simples avec chaque enzyme sur le vecteur de clonage
Quel est l’effet de cette digestion?
la linéarisation qui entraîne la perte des structures enroulées de l’adn
Comment analyser les résultats?
un adn linéaire aun plus faible poids moléculaire qu l’adn circulaire en gel d’agarose (prof pas d’accord anyway)
Étape entre la digestion et la ligation du fragment?
Purification du fragment
Quelle est l’enzyme ligase la plus utilisée en bio mol?
ADN ligase du bactériophage T4
Caractéristiques de l’adn ligase T4?
1- lie de façon covalente 5’P et 3’OH
2- Besoin d’atp
3- Inactivable par la chaleur
4- liason chm entre un insert et un vecteur digéré
Pourquoi l’efficacité de ligation est meilleure avec un bout cohésif?
Les bouts cohésifs forment déjà des ponts H, les séq à lier sont maintenues ensemble.
Avec les bouts francs, l’efficacité est dépendante de la probabilité de contact moléculaire selon le mvt brownien et la concentration d’adn
Quelle est l’étape la moins efficace d’un processus de clonage moléculaire?
La ligation
Ration insert:vecteur idéal?
3:1
Quel est l’effet d’une ligation?
Circularisation du vecteur -> structures enroulées -> poids moléc plus élevé -> le vecteur est maintenu dans les cellules après transformation
Comment réduire la probabilité de sélectionner le vecteur parental suite à la transformation? (3)
1) purification du vecteur digéré
2) digestion dans l’insert parental
3) déphosphorylaton du vecteur
Quelle est l’enzyme déphosphorylante des vcteur parentaux?
la shrimp alcaline phosphatase
Vrai ou faux. La majorité des espèces bactériennes doivent être traîtée pour devenir compétente?
Vrai, elles doivent être traîtée chimiquement et physiquement.
