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A22 - Methodes Expérimentales > Cours 7 - Microscopie > Flashcards

Cours 7 - Microscopie Flashcards

1
Q

Qu’est-ce que le pouvoir de résolution

A

la plus petite distance entre deux points pouvant être distinguée par un microscope.

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Q

Vrai ou Faux
Le grossissement d’un objet n’améliore pas nécessairement la résolution de l’image

A

Vrai

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3
Q

Qu’est-ce que la limite de résolution

A

La distance minimale pour distingués 2 points

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4
Q

Formule de la résolution

A

r = 1.22λ / 2*ON

R = Résolution

λ = La longueur d’onde de la lumière qu’on utilise pour illuminer l’échantillon

ON = Ouverture numérique

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Q

Vrai ou Faux
Plus r est grand, mieux est la résolution

A

Faux
C’est l’inverse

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6
Q

Vrai ou Faux
Plus on augmente le grossissement, plus on augmente la résolution

A

Faux
Pas nécessairement

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7
Q

Des longueurs d’ondes plus longue (Rouge) donnent une résolution plus _______

A

Faible

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8
Q

Qu’est-ce que le spectre visible

A

AKA: Spectre lumineux ou optique

  • La partie du spectre électromagnétique qui est visible pour l’oeil humain
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9
Q

La formule de l’ouverture numérique

A

ON = n x sin(α)

n = Indice de réfraction du milieu
α = Angle auquel la lumière pénètre l’objectif du microscope

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10
Q

Qu’est-ce que l’indice de réfraction

A

Les changements de vitesse de la lumière pendant sa propagation à travers d’un milieu (1 = vide; 1.33 = air)

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11
Q

Un objectif avec une ON supérieure conduit à une puissance de résolution ___________

A

Permettra de recueillir plus de rayons lumineux
=> Meilleur résolution

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12
Q

Nommez une limitation de la microscopie optique

A

Elle est limité par la diffraction de la lumière
- Spectre visuel min = ~400 nm
- On moyenne = ~1

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13
Q

Nommez 2 méthodes pour éviter les limitations de la microscopie optique

A

1) Utiliser des longueurs d’ondes hors le spectrum de lumière visible (microscope électronique: faisceau de particules d’électrons)

2) Modifier le patron de diffraction de la lumière (Microscopie STED)

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14
Q

Nommez 2 type de microscopes selon la formation de l’image

A

1) Simple
2) Composé

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15
Q

Nommez 1 différence entre la microscopie simple et composé

A

Simple:
- Une seule lentille

Composé:
- Plusieurs lentilles

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16
Q

Nommez un avantage de la microscopie composé

A

Augmente le grossissement

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17
Q

Nommez 1 exemple de microscopie simple

A

Une loupe

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18
Q

Lentille de l’objectif vs lentille oculaire

A

Lentille de l’objectif:
=> Proche a l’échantillon

Lentille oculaire:
=> Proche de l’oeil

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19
Q

Nommez 3 composants d’un microscope composé

A

1) La lentille de l’objectif
2) Le condensateur
3) La lentille oculaire

20
Q

Quel est le rôle d’un condensateur dans un microscope composé

A

Focalise la lumière de la source sur l’échantillon

21
Q

Nommez 4 types de modalités de microscopie optique

A

1) Microscopie en champ CLAIR
2) Microscopie à contraste de PHASE
3) Microscopie en champ SOMBRE
4) Microscope à contraste interférentiel ou Nomarski

22
Q

Nommez 4 types de microscopie à fluorescence

A

1) Microscopie à fluorescence STANDARD (epifluorescence)
2) Microscopie à fluorescence CONFOCALE
3) Microscopie à deux-photons (multiphotonique)
4) Microscopie STED (déplétion par émission stimulée)

23
Q

Qu’est-ce qu’un fluorophore

A

Substance chimique capable d’émettre de la fluorescence après excitation par la lumière

24
Q

Nommez 4 avantages de la microscopie à fluorescence en général

A

1) DÉTECTER des molécules marquée a la fluorescence
2) PLUSIEURS fluorophores simultanément
3) Très bon RAPPORT signal/bruit
4) Très SENSIBLE, permet la détection de molécules en faible quantité

25
Q

Nommez 1 rôle associé à la fluorescence standard

A

Acquisition des images relativement simple (par rapport a la microscopie confocale ou multi-photonique).

26
Q

Nommez 4 limitations de la microscopie à fluorescence standard

A

1) Photoblanchiment (La lumière émise par le fluorophore diminue avec le temps)
2) Phototoxicité (Peut causer la mort cellulaire)
3) Le bruit de fond peut être élevé a cause de la fluorescence non spécifique ou l’autofluorescence du tissue
4) Il faut que l’objet soit dans le plan focal du système optique
=>Problématique pour les objets épais

27
Q

Expliquez le fonctionnement d’un microscope confocale

A

1) Utilise une illumination focalisée sur un point dans un PROFONDEUR SPÉCIFIQUE de l’échantillon (plan focal) a différents niveaux de profondeur
2) Réaliser des séries d’images à partir desquelles on peut obtenir une représentation 3D de l’objet (z-stacks) (recomposée par l’ordinateur)
=> Image 3D

28
Q

Expliquez le fonctionnement d’un microscope à fluorescence standard

A

1) Lumière passe à travers le filtre d’excitation
2) Lumière absorbée par les fluorophores causant leur excitation
3) Émission d’une lumière (λ plus longue)
4) La lumière émise est capturée par l’Objectif
5) Filtre d’émission
6) Détection (Oeil ou caméra)

29
Q

Nommez 3 avantages de la microscopie confocale

A

1) Images extrêmement nettes
2) Seules les images dans le plan focal sont ramassées
3) => Permet l’imagerie des échantillons plus épais

30
Q

Nommez 2 limitations de la microscopie confocale

A

1) Le balayage requière une illumination des échantillons a LONG-terme (=> Augmente le photoblanchiment)
2) Processus LENT (=> Difficile de visualiser des évènements rapides)

31
Q

Nommez 3 avantages du microscope à 2-photons

A

1) La fluorescence est localisée sur un PLAN focal très étroit
=> Réduit grandement le photoblanchiment
=> Images plus claires (Bruit de fond très bas)
2) Permet la visualisation des cellules ou structures plus PROFONDES
3) La longueur d’onde de la lumière excitatrice est typiquement dans le proche INFRA-ROUGE
=>Rentrant plus facilement dans le tissu sans phototoxicité

32
Q

Nommez 1 limitation du microscope à 2-photons

A

Nécessite des équipements spécialisés et couteux (> 1M$)

33
Q

Nommez 1 avantage de la microscopie de l’épuisement d’émission stimulée (STED)

A

Super résolution

34
Q

Expliquez le fonctionnement de la microscopie de l’épuisement d’émission stimulée (STED)

A

Il se sert de deux rayons laser:
Rayon 1) Excite les bornes fluorescentes
=> Forme un point
Rayon 2) Pour l’épuisement (Désactivation sélective)
=> Forme un beignet

35
Q

Nommez 2 limitations de la microscopie électronique

A

1) Échantillons PRÉPARÉS
- Les échantillons sont fixés, déshydratés et traités avec des agents chimiques
=> Peu de chance de visualiser des cellules vivantes
2) Présence des ARTEFACTS visuels causé par le traitement du tissue

36
Q

Qu’est-ce que le grossissement

A

Il réfère à combien de fois l’échantillon appraraît plus grand par rapport à sa taille réelle

37
Q

Nommez 2 principes essentiel en microscopie

A

1) Le grossissement
2) La résolution

38
Q

Expliquez le fonctionnement de la microscopie à fluorescence

A

Technique utilisant un microscope optique COMPOSÉ équipé d’un émetteur à laser qui permet la sélection d’une longueur d’onde précise

39
Q

Nommez 1 rôle des fluorophores

A

Ils peuvent être couplés aux protéines, ac. ou d’autres sondes pour visualiser des molécules et structures dans une cellule

40
Q

Vrai ou Faux
Il est possible de combiner des fluorophores en microscopie à fluorescence

A

Vrai
Ils faut choisir des molécules avec des spectres d’excitation et émission différents

41
Q

Pour qu’une image soit nette en microscopie à la fluorescence standard, il faut que ____________________________

A

Que l’objet soit dans le plan focal du système optique
** Ceci cause problème quand l’objet est épais **

42
Q

Expliquez pourquoi la microscopie à fluorescence standard n’est pas idéal pour les objets épais

A

Car quand l’objet est épais la lumière émise par le plan focal (nette) est perdu dans la fluorescence émise par les plans adjacents (flou)

43
Q

Qu’est-ce que le microscope à 2 photons

A

Il s’agit d’une variation plus sophistiquée de la microscopie à fluorescence: - Le fluorophore est excité en absorbant 2 photons simultanément (évènement rare)

44
Q

Qu’est-ce que le photoblanchissement

A

La diminution de la lumière émise par le fluorophore avec le temps

45
Q

Expliquez le fonctionnement du microscope électronique

A

1) Un faisceau de particule d’électrons illumine l’échantillon
2) La projection de l’objet créer une image très agrandie

46
Q

Quelle technique de microscopie permet l’observation des plus petites structures du système nerveux comme la synapse

A

Le microscope électronique

A22 - Methodes Expérimentales (15 decks)

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