Cours 13 - Manipulation des Gènes Endogènes Flashcards
Nommez 4 rôles de la modélisation animales et les manipulations génétiques
1) MARQUER sélectivement des sous-populations données
=> Étudier le développement et la fonction au sein des circuits
2) Étudier l’effet de la PERTE/ GAIN d’un gène donné sur les circuits neuronaux
3) Étudier l’impact de nouvelles MUTATIONS sur les circuits
4) Étudier les voies moléculaires impliquées dans les FONCTIONS normales /pathologies du SNC
Nommez 2 techniques de marquage génétique sélectif
1) Transgène (promoteur spécifique)
2) Knock-in
Nommez le rôle d’un transgène
Permet d’exprimer une construction exogène
Nommez le rôle de la technique Knock-in
Modifier un gène endogène par recombinaison homologue
Nommez 3 avantages de marquage génétique sélectif (Transgènes et Knock-in)
1) Visualiser les cellules
- Étudier leurs propriétés fonctionnelles / biochimiques
- Étudier leur distribution
2) Extraire sélectivement des populations données
- Études de profilage
3) Visualiser des structures anatomiques cellulaire in vivo
Nommez 3 techniques de perte de fonction
1) Délétion de gènes endogènes
2) Mutations ciblées
3) Répression de l’expression (ARN)
Nommez 3 techniques de gain de fonction (surexpression)
1) Correction d’une perte de fonction
2) Étude de l’effet d’un gène à différentes étapes du développement
3) Modifier l’activité d’un circuit neuronal à différents moments
Qu’est-ce que l’effet positionnel
Lorsque l’expression ne concorde pas avec celle attendue pour le promoteur choisi du à une intégration différente dans le génome
Différence(s) entre Knock-in et Knock-out
Knock-in:
=> Insertion d’un nouveau gène au site d’un autre gène
Knock-out:
=> Ablation d’exons d’un gène cible pour le rendre inactif
Nommez 3 techniques de transfère de plasmides
1) Électroporation in utero
2) Transfectation biolystique
3) Vecteur viral
Définition de knock-in
Insertion d’une cassette permettant d’exprimer une protéine d’intérêt après le codon d’initiation sous le contrôle du promoteur endogène (remplacement d’un gène endogène)
Nommez 3 rôles d’un transgène
1) Vérifier l’expression d’un gène X pré- et post-natal
2) Marquer une population cellulaire
3) Sur-exprimer un gène X (Gain de fonction)
Nommez 1 rôles de Tet On/Off
1) Exprimer un transgène à un moment précis
Nommez 2 rôles de Knock-in
1) Expression d’un marquer au site endogène
2) Insertion d’une mutation ciblée (Pas d’effet positionnel)
=>Plus fiable
Nommez 1 limitation des transgènes
1) Expression non-spécifique ou trop sélective (effet positionnel)
Nommez 1 limitation du Tet On/Off
1) Expression selon le promoteur
Nommez 1 limitation de Knock-in
1) L’intensité de l’expression dépend du locus (Parfois plus faible que transgène)
Nommez 2 limitations de Knock-out
1) Parfois létal
2) Ubiquitaire (toutes les cellules)
Nommez 1 limitation du Knock-out conditionnel
1) La spécificité dépend de l’allèle Cre (Allèle reportrice)
Nommez 2 limitations du Knock-down
1) Effet non-spécifique
2) Toxicité?
Nommez 1 limitation de CRISPER
1) Difficile de contrôler le taux de HR
Nommez 1 rôle du Knock-out
1) Perte de fonction du gène
Nommez 2 rôles Knock-out conditionnel
1) Perte de fonction sélective dans une population donnée
2) Précision temporelle (Cre-ER)
Nommez 2 rôles du Knock-down (shARN, miARN)
1) Répression d’un gène avec une précision temporelle
2) Rapidité et flexibilité
