Cours 6 - Recepteurs Nucléaires Flashcards
Quel est la molécule précurseur de toutes les hormones stéroïdiennee ?
Cholestérol
Quelle est l’étape limitante dans la formation des hormones steroidiennes ?
Lorsque la chaine latéral du cholestérol est coupée par la P450scc
Donne le nom de 5 hormones steroidiennes produites a partir du cholestérol ?
Aldosterone (sel)
Cortisol(sucre/stress) p450c17
Testosterone p450aro
Estradiol 17b-HSD
Progesterone
Donne 4 proteines de transport des hormones lipidiques ?
Albumine
CBG
SHBG
TBG
C’est par quelle technique qu’on a pu reconnaître la majorité des recepteurs nucléaires d’aujourd’hui ?
Via homologie de séquences
Est ce qu’on connait tous les ligands des recepteurs ?
Non y’a des recepteurs orphelins on sait qu’ils existent mais on ne connaît pas leur activateur
Ex : ERR qui lie pas estradiol
Est ce que les recepteurs nucléaires ont bcp de fonctions associées
Ouiii pleins
Métabolisme
Dvlp foetal
Diff et croissance cellulaire
A quelle famille appartiennent les recepteurs nucléaires ??
Facteurs de transcription
Quelles sont les 3 caractéristiques clés des recepteurs nucléaires ?
Interaction hormone-proteine :
Activation avec liaison du ligand
Interaction protéine-ADN :
Avec promoteur ADN
Interaction protéine-protéine :
Entre le récepteur et les coactivateurs et la machinerie transcriptionnelle de base
Structurellement quelles sont les 3 composantes majeurs d’un recepteur nucléaire et ses caractéristiques ?
Domaine AF-1 :
En N-t il est très VARIABLE il est activé par PHOSPHORYLATION il associe les COFACTEURS et la TRANSCRIPTION
Doigt de Zinc :
Au milieu il est TRÈS TRÈS CONSERVÉ il lie l’ADN fait la DIMERISATION et aide a la LOCALISATION NUCLÉAIRE
Domaine AF-2 :
En C-t il est Très CONSERVÉ il lie le LIGAND les CHAPERONS les COFACTEURS et la TRANSCRIPTION
Quel est le domaine le plus conservé dans les recepteurs nucléaires ?
La structure des doigts de Zinc
Est ce que les domaines AF1 et AF2 sont dépendants ?
Nonn l’un peut fonctionner sans l’autre
Quel est le recepteur nucléaire qu’on retrouve bcp dans le cytoplasme ? Comment est il transloque dans le noyau ?
Celui des glucocorticoide
L’arrivée du cortisol dissous le lien avec les chaperones HSP90 qui bloquaient le recepteur dans le cytoplasme
=> translocation noyau
La majorité des recepteurs nucléaires sont ou ?
Deja dans le noyau voire deja lie a l’ADN juste ils sont inactifs
Y’a combien de doigts de zinc sur un monomère recepteur nucléaire ? Il s’agit de quel type de doigts de zinc ? Y’en a combien de type en tout ?
2 doigts de zinc
Doigt de zn avec 4 CYS
3 types
4 CYS
2 CYS 2 HIS
6 CYS
Est ce qu’une mutation des cys des doigts de zinc des recepteurs nucléaires serait grave ?
Oui catastrophique
Explique moi la configuration d’un recepteur homodimerique et ses caractéristiques ?
Donc 2 monomeres identiques
Ex : ER - ER
Ils sont en configuration inversée, c’est a dire qu’ils vont reconnaître sur l’ADN une IR-3 soit une region palindromiques inversée séparée par 3 Nucléotides
Explique moi la configuration d’un recepteur heterodimerique et ses caractéristiques ?
Donc 2 monomeres différents dont 1 est quasi tjrs RXR
Ex : VDR-RXR
Ils sont en configuration direct, c’est a dire qu’ils vont reconnaître sur l’ADN une DR-? des séquences répétées dans le meme sens séparées par un nombre VARIABLE de nucleotides
Mais du coup ou reside la spécificité de liaison au niveau de l’ADN pour les differents recepteurs ?? Et cela se traduit ou sur le recepteur ??
Au niveau deux 2 NUCLEOTIDES qui sont dans ces séquences IR3 ou DR?
Sur 3 acides aminés du doigts de zinc autour des cys conservées
Quelle est l’expérience clé qui permet d’étudier l’activité des facteurs de transcription ? Quel a été son 1er rôle ?
Essai de gène rapporteur de la luciférase par transfection cellulaire pour mesurer l’activité des facteurs de transcription
Identifier les éléments de réponse des promoteurs
Avec l’essai à la luciferase qu’a on pu tirer comme info sur l’identification des éléments de réponse des promoteurs
Qu’il y’avait 2 sites de liaisons sur les HRE (Element de reponse hormonale (un peu comme promoteur))
Si tu perds ces sites ou tu as des mutations dedans bah y’aura une baisse de la transcription
C’est quel analyse qui a permis d’identifier les sites de liaison du recepteur nucléaire ERalpha sur les gènes ?
Qu’a t on decouvert ?
Analyse ChiP
Immunoprecipitation de la Krmatine
La régulation distale du ERalpha par des enhancers car plus le site de liaison est distale plus y’a une grande activité
qu’est qu’on a identifié d’autres via l’analyse ChiP ?
D’autres facteurs de transcription clé comme FoxA1 à proximité de ERE
C’est quoi le rôle de la proteine FoxA1 dans la réponse estrogenique ?
Facteur de transcription pionnier qui permet de dicter l’arriver de ERalpha aux éléments ERE du génome
En gros il ouvre la chromatine pour l’arrivée de ERalpha
Est ce qu’on a la structure cristallographique du domaine AF1 des Rnucleaires ?
Noon trop dynamique et variable
Ou s’inserent les ligands dans les récepteurs nucléaires ?
Dans la cavité hydrophobe
Quel est l’autre nom du domaine AF2 ? Son rôle ?
Helice 12 en C-t
Se referme lors d’arrivée d’un ligand pour recruter un cofacteur et activer la transcription
(Trap mouse)
Si antagoniste = reste ouverte = pas de cofacteur = pas de transcription
Un antagoniste du ERalpha ?
Tamoxifen
Deuxième rôle de l’essai a la luciferase ? On a decouvert quoi ?
Identifier les domaines fonctionnels d’activations de la transcription
Bah AF2 et AF1 qui sont importants et indépendants (AF2 un peu plus car liaison au ligand)
Doigt de zinc est essentiel pour l’activité transcriptionnelle car sans lui pas de liaison a l’ADN
C’est le domaine AF1 ou AF2 qui peut être régulé par les facteurs de croissance via phosphorylation ?
AF1 (avec EGF par exemple et les MAPK)
Ou sont exprimés les recepteurs des estrogenes ERaplha ? Ils modulent quoi ?
Tissu reproducteur genre uterus ovaire glande mammaire
(Mais aussi chez les hommes en vrai)
Module l’expression des recepteurs de la progestérone
Si on fait souris ERalphaKO il se passe quoi ? Ressemble a quel phénotype ?
Viable mais INFERTILE
Uterus petit
Pas d’ovulation ni FOLLICULOGENESE
Glande mammaire faible
(Qqls activités dues au ERBeta)
Phénotype de PgRKO
C’est quoi un cancer du sein hormono dependant ? On traite ça comment ? (2)
Hormono dependant ça veut dire qu’il est positif pour ER et PR Donc que les cellules cancéreuses expriment ces recepteurs
On peut donc les traiter avec des thérapies hormonales comme
Bloquer l’aromatase = bloquer synthese de novo des estrogenes
Bloquer le ER
Est ce que c’est bien d’avoir la présence de ERalpha positif dans le cancer du sein ? Nuance la réponse
Non pck agressive
Mais oui car possibilité de traitement antiestrogene SERMS
C’est quoi le problème des antiestrogenes SERMS ? Et aussi leur particularité ?
Tamoxifene
Raloxifene
=> resistance a ces medocs
Ils sont très tissus specifique parfois peuvent etre antagoniste parfois agoniste
Y’a quoi comme pb chez une souris ERbetaKO ?
Contrairement ERalphaKO bah y’a juste une diminution de la fertilité (ovaire) chez la femelle et qql pbs de memoire
Mais elle reste fertile et viable avec uterus et glande mamaire fonctionnelle
Y’a quoi comme pb chez une souris ERalpha/betaKO ?
Infertile
Les organes males ok
Mais femelles bad
Pb de croissance
Dans le cas de l’humain ERalphaKo on observe quoi ?
Chez les femmes homozygotes elles meurent
Homme homozygotes :
Estrogene plasmatique trop eleve
Donc FSH et LH skyhigh
Maturation osseuse déficiente
Le recepeteur des glucocorticoides est l’antagoniste de quoi ?
Facteur de transcription NFkBeta dans la réponse pro inflammatoire
Que se passe t il dans une souris KO pour GR ?
PAS VIABLE
Poumon foireux
Glandes surrénales énormes
Il joue un rôle dans quoi le recepteur a la progestérone ? Y’a quoi si on le KO ?
Rupture de la paroi ovarienne
Arborisation dans la glande mammaire
Maintient de la grossesse
Pareil que ERalphaKO viable mais infertile
Elle fait quoi la pilule du lendemain ?
C’est un agoniste du PR qui va perturber l’ovulation la fertilisation et la nidification
C’est quoi la pilule abortive ?
RU486
Antagoniste du PR
C’est quoi la pilule abortive ?
RU486
Antagoniste du PR
Le recepteur MR est implique dans quoi ? Si on le KO ça fait quoi ?
Lie aldosterone se trouve sur les tubules renaux et est impliqué dans le transport des électrolytes
Cible les pompes Na/K ATPase
Mort 10j apres car déshydratation pas de retention d’eau ni de sel
Quelle est la particularité des recepteurs androgènes ?
Variabilité génétique énorme donc sujets a plusieurs formes de résistance aux androgènes
Y’a quoi dans une souris ARKO ?
Spermatogenèse deficiente et petits testicules
Chez les femmes bah pas trop fertile
En reponse au ligand a quoi se lient les cofacteurs ?
Les SRC (cofacteurs) se lient au domaine AF-2
Est ce que les cofacteurs sont aussi essentiels que les recepteurs dans la réponse hormonale ? Donne exemple
Ouiii ex : souris KO SRC-3
Phénotype similaire a ERalphaKO / PgRKO
Quelle particularité à le coactivateur CBP ?
Il a une activité HAT qui permet l’ouverture de la Krmatine donc transcription enhance
Est ce que cofacteur p300 et CBP sont indispensables a la viabilité ?
Ouiii mm une mutation hétérozygote
Est NON VIABLE chez le souris
Chez l’humain tu es retardé mentalement
Explique un peu le modele combinatoire de transcription par les recepteurs nucléaire ?
En gros c’est un cycle de recrutement et relâchement de cofacteur avec des prots facilitant ça et la transcription
