cours 5

Question 1

chromatographie échangeuse d’ions

Answer 1

• Séparation selon la charge nette des composés (+ ou -)
• Phase stationnaire = groupes fonctionnels chargés négativement ou positivement
• Adsorption des solutés par liaisons ioniques (+ ou -) et déplacement des contre-ions
• Les composés de même charge ou de charge neutre (nette) ne
  sont pas adsorbés sur la phase stationnaire

Question 2

élution chromatographie échangeuse d’ions

Answer 2

augmentant concentration en sels ou en
changeant le pH de la phase mobile

Question 3

élution avec le sel

Answer 3

• compétitionnent pour la phase stationnaire
• neutralisent les charges des composés et protéines

Question 4

élution avec pH

Answer 4

• Change la charge nette des composés et protéines
  (charge des groupements fonctionnels)

Question 5

point isoélectrique

Answer 5

pH auquel la charge nette d’une molécule (protéine) est nulle

Question 6

chromatographie liquide haute performance (HPLC)

Answer 6

• Même principe que chromatographie sur colonne classique
• Utilisation de système sophistiqué haute performance ($$$)
• Fortes pressions (vs gravité), séparation rapide, haute résolution
• Détection en temps réel possible
• Compatibles avec autres types chromatographie

Question 7

injecteur HPLC

Answer 7

volume injecté entre 10 et 100 μl

Question 8

pompe HPLC

Answer 8

pompe à haute pression (entre 5000-7000 psi)

Question 9

colonne HPLC

Answer 9

longueur et diamètre différent

Question 10

chromatographie HPLC

Answer 10

exclusion, adsorption (polarité), hydrophobe, affinité, éch. ions, etc.

Question 11

phase mobile HPLC

Answer 11

la nature, polarité, force éluante

Question 12

détecteur HPLC

Answer 12

UV, IR, électrochimie, réfractomètre, MS…

Question 13

élution HPLC

Answer 13

mode isocratique ou mode gradient

Question 14

détecteur UV visible UVD

Answer 14

• Mesure l’absorption de la lumière par le produit à la sortie de la colonne
• Sensibilité de l’ordre du ng
• Il faut que le produit à détecter absorbe la lumière à une longueur d’onde accessible à l’appareil
• Quantitatif (loi de Beer-Lambert)
• Il est important que la phase mobile n’absorbe pas la lumière à la longueur d’onde choisie
• Polyvalent mais peu spécifique

Question 15

fluorimètre FLD

Answer 15

• Mesure de la fluorescence émise
• Plus sélectif et sensible que UV-visible (jusqu’au fg)
• L’intensité de la fluorescence est directement proportionnelle à la concentration
• Inconvénient: peu de composés sont naturellement fluorescents…

Question 16

réfractomètre (RID)

Answer 16

• Mesure la variation de l’indice de réfraction à la sortie de la colonne
• C’est une mesure extrêmement précise mais peu sensible (μg)
• On compare cet indice avec celui de la phase mobile pure
• Utiliser seulement en mode isocratique
• Sensible aux variations de température

Question 17

détecteur électrochimique

Answer 17

• Mesure le changement de courant électrique produit par la réduction ou oxydation d’une
  substance à une électrode
• Limité aux substances oxydables ou réductibles
• Très grande sensibilité (fg)
• L’échantillon est modifié au cours de la mesure (méthode destructive)

Question 18

spectrométrie de masse (MS)

Answer 18

• Largement utilisée (qualitatif et le quantitatif), surtout en protéomique (HPLC-MS)
• Idéal pour les mélanges complexes et composés inconnus
• Détermine la composition, la structure et la masse moléculaire des solutés
• Grande sensibilité de l’ordre du ng/pg (10-9 à 10-12)
• Méthode puissante mais $$$
• Les composés doivent être ionisables (méthode destructive)

Question 19

acides aminés ionisables

Answer 19

• Acides et basiques
• Groupes terminaux (NH2 et
  COOH)
• Possibilité de digérer les
  protéines (trypsine,
  chymotripsine, etc.)

Question 20

chromatographie en phase gazeuse (CPG)

Answer 20

• Applicable à des échantillons gazeux ou susceptibles d’être vaporisés (sans se
  décomposer)
• La phase mobile est un gaz
• Phase stationnaire liquide (non-volatil) ou solide
• Séparation selon solubilité/adsorption avec phase stationnaire + point d’ébullition (volatilité)
• Différents types de détecteur possibles (dont le MS