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principes de méthodologie en biologie > cours 4 > Flashcards

cours 4 Flashcards

chromatographie

1
Q

vrai ou faux
une seule purification lors de centrifugation est suffisante

A

faux
le composé peut ne pas être pur donc il faut faire une combinaison de plusieurs méthodes de purification

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2
Q

chromatographie

A

Ensemble de méthodes qui assurent la séparation des constituants d’un mélange en
utilisant deux phases non miscibles

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3
Q

phase stationnaire

A

immobile choisie pour sa grande affinité pour les divers solutés
liquides, gazeuses ou solides

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4
Q

phase mobile

A

entraîne les divers solutés le long de la phase stationnaire
liquides, gazeuses

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5
Q

sur quoi repose la séparation

A

sur l’affinité des substances pour la phase stationnaire
(ou la phase mobile)

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6
Q

que signifie une grande affinité pour la phase stationnaire

A

Migration + lente

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7
Q

que signifie une petite affinité pour la phase stationnaire

A

Migration + rapide

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8
Q

sur quoi influence l’affinité des molécules

A

sur leur solubilité différente dans chaque phase (phase liquide ou aqueuse)
sur leur adsorption (et désorption) sur la phase stationnaire (phase solide)

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9
Q

classification des chromatographies

A

A) Selon l’état des phases
B) Selon le mode d’immobilisation de la phase stationnaire
C) Selon le principe des interactions entre les solutés et la phase stationnaire
D) Selon les modalités de migration de la phase mobile

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10
Q

classification selon l’état des phase

A

toujours se fier à la phase mobile pour déterminer l’état des phases

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11
Q

classification selon le mode d’immobilisation de la phase stationnaire

A

phase stationnaire immobilisée par l’étendue sur une surface plane : chromatographie de surface ou soit à l’intérieur d’une colonne :
chromatographie sur colonne

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12
Q

classification selon le principe des interactions entre les solutés et la phase stationnaire

A

adsorption
partage
échange d’ions
filtration sur gel
affinité
interactions hydrophobes
chélation

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13
Q

adsorption

A

liaisons de faibles énergies assurant la fixation des solutés à la phase stationnaire.

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14
Q

partage

A

solubilisation différentielle des solutés entre phases mobile et stationnaire liquides.

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15
Q

échange d’ions

A

liaisons ioniques entre les charges du soluté et de la phase stationnaire.

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16
Q

filtration sur gel

A

(pas de liaison) diffusion/exclusion des solutés dans une phase stationnaire solide
poreuse

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17
Q

affinité

A

interactions biospécifiques (E-S, Ag-Ac) entre les solutés et la phase stationnaire porteuse d’un ligand

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18
Q

INTERACTIONS HYDROPHOBES

A

liaisons hydrophobes entre la phase stationnaire et les solutés.

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19
Q

chélation

A

liaisons entre un métal divalent (phase stationnaire) et les solutés porteurs de doublets d’É libres

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20
Q

classification selon les modalités de migration de la phase mobile

A

chromatographie par élution
chromatographie par déplacement

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21
Q

chromatographie par élution

A

-Sortie des solutés de la phase stationnaire grâce à un éluant ajouté à la phase mobile
(solvants/tampons)
- Variation brusque ou continue de la concentration ou composition de l’éluant
- Brise les interactions solutés/phase stationnaires (force ionique, polarité)

22
Q

chromatographie par déplacement

A
  • Maintien des solutés dans la phase stationnaire (déplacement)
  • Révélation des solutés présents dans la phase stationnaire (coloration ou autre)
23
Q

chromatographie sur couche mince (phase liquide)

A

phase stationnaire fixée sur une plaque généralement polaire
phase mobile migre par capillarité et moins polaire
Chaque composant se déplace à sa propre vitesse derrière le front de solvant

24
Q

comment se fait la rétention des solutés par la phase stationnaire

A

surtout par adsorption par forces électrostatiques (et solubilité)

25
Q

calcul du rapport frontal pour chaque composé séparé

A

𝑅𝑓 = 𝑑 (𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡é)/ 𝐷 (𝑠𝑜𝑙𝑣𝑎𝑛𝑡)

26
Q

Rf faible

A

molécule très hydrophile
lien avec la silice donc très polaire

27
Q

Rf élevé

A

molécule très hydrophobe car se solubilise dans le solvant

28
Q

application de la CCM

A

Permet un contrôle facile et rapide de la pureté d’un composé organique.
* Très utile pour rechercher le meilleur solvant avant d’entreprendre une
séparation par chromatographie sur colonne

29
Q

révélation de la CCM

A

directe ou indirecte

30
Q

révélation de la CCM directe

A

Pour substances naturellement colorées

31
Q

révélation de la CCM indirecte

A

UV (230-365 nm) pour composés
absorbants dans cette région
- Révélateurs chimiques (méthode
destructive)
- Parfois les deux

32
Q

chromatographie sur colonne

A

filtration sur gel
affinité
hydrophobe
échanges d’ions

33
Q

chromatographie par filtration sur gel synonyme

A

Gel-filtration
Chromatographie d’exclusion
Tamis moléculaire
tamisage moléculaire

34
Q

chromatographie par filtration sur gel

A

Méthode de séparation basée selon la taille des solutés qui utilise un tamis moléculaire.
* Phase stationnaire: microbilles poreuses.
* Séparation basée sur la capacité des différentes molécules à diffuser dans les pores
* Aucune liaison moléculaire entre le soluté et la phase stationnaire

35
Q

Vo

A

Les solutés&raquo_space; limite d’exclusion sont éluées
dans le volume mort

36
Q

Velution

A

Dans la zone de séparation, les molécules sont
éluées en fonction de leur PM

37
Q

Vtotal

A

Les molécules de plus petites tailles sont éluées dans un volume égal ou supérieur au
volume total du gel

38
Q

coefficient de partage (Kav)

A

Le soluté est distribué entre l’eau interne et l’eau externe

39
Q

K=0

A

le soluté est totalement exclu

40
Q

0 < K < 1

A

le soluté est partiellement inclus

41
Q

K = 1

A

valeur théorique (inclusion totale)

42
Q

K > 1

A

le soluté est inclus et adsorbé

43
Q

chromatographie d’affinité

A

Repose sur l’interaction spécifique entre deux molécules (affinité)
* Le soluté à séparer se fixer réversiblement à un ligand spécifique attaché à une matrice
insoluble (covalent)
* Ex: anticorps sur matrice, liaison spécifique avec antigène à purifier

44
Q

exemples d’application de la chromatographie d’affinité

A

enzyme-substrat, anticorps-antigène, ligand-récepteur…
GÉNÉRALEMENT EN CONDITIONS NON-DÉNATURANTES

45
Q

élution

A

Gradient de pH ou force ionique croissante (continu ou discontinu)
- Gradient de ligand avec plus forte affinité (compétition)

46
Q

que nécessite la chromatographie d’affinité

A

Nécessite une connaissance préliminaire de la structure et de la spécificité biologique
du composé à purifier
OU
* Utilisation d’étiquettes protéiques (tags) via génie génétique

47
Q

IMAC

A

Affinité entre protéine et atome métallique
Résine populaire: Ni-NTA (6 liens de coordination (partage d’É)
Utilisation d’étiquette 6xHis-tag
* Élution via imidazole (ou pH <6)

48
Q

chromatographie d’interactions hydrophobes

A

Séparation selon le degré d’hydrophobicité des composants.
* Phase stationnaire: on utilise des résines portant des groupements hydrophobes
(cycliques ou aliphatiques).
* Phase mobile: tampon avec gradient de concentration en sels (+ vers -).
* Les sels favorisent les interactions hydrophobes (masquent interactions électrostatiques
et compétitionnent pour les molécules d’eau)

49
Q

vrai ou faux
Plus une protéine est hydrophobe, moins elle a
besoin de sels pour interagir

A

vrai

50
Q
A

principes de méthodologie en biologie (5 decks)

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