corynebact Flashcards
Corynebacterium diphteriae - caractere generale
- bacili Gram+ la limita, polimorfi, maciucati, dispusi sub forma de litere chinezesti sau palisade
- perete celular cu acizi micolici cu lant scurt
- se coloreaza neregulat - inegalitate tinctoriala - corpusculii BABES-ERNST
- aerobi facultativ anaerobi
- imobili, nesporulati, necapsulati
- catalaza pozitivi
- oxidaza negativi
- fermenteaza carbohidratii cu productie de acid lactic
- necesita suplimentare cu lipide a mediului (tulpini lipofile)
- dupa incubare peste noapte pe geloza sange: colonii mari
- cand sunt si alte microorgansime prezente, sunt necesare medii diferentiale
- portaj asimptomatic la nivelul orofaringelui si pielii
- in principal boala pediatrica
Corynebacterium diphteriae - caractere de patogenitate
- agentul etiologic al difteriei
- principalul factor de virulenta: toxina difterica (gena tox introdusa prin bacteriofagi lizogenici) (exotoxina)
Toxina difterica este produsa in focarul de infectie, apoi disemineaza pe cale hematogena: semne sistemice de difterie. Determina miocardita si e neurotoxica. - la nivel celular toxina difterica determina blocarea sintezei celulare cu moarte celulara
- cord factor - virulenta si invazivitate
- granulatii Babes-Ernst de polifosfat metacromatice
Corynebacyerium diphteriae - diagnsotic de lab.
Diagnosticul de laborator: izolarea si identificarea bacilului difteric si punerea in evidenta a caracterului toxigen!!!
Recoltare+transport
Pt. localizarea respiratorie se recolteaza tampoane de la nivelul faringelui si nazal. Daca exista pseudomembrane, se desprinde marginea mb. si se recolteaza serozotatea de sub aceasta.
Pentru localizarea cutanata se recolteaza probe de la nivelul leziunii
In total se recolteaza 3 tampoane.
Se transporta cat mai repede (daca dureaza mai mult de 2 h se foloseste mediu de transport)
Cele trei tampoane recoltate din produsul patologic se prelucreaza astfel:
I) frotiuri pt. caractere morfologice
II) se insamanteaza pe mediu de imbogatire cu ou, cistina si telurit (OCST)
III) se insamanteaza pe medii de cultura pentru examinarea caracterelor de cultura.
Izolarea primara se realizeaza prin insamantarea pp pe medii de cultura selective si neselective.
Mediile de cultura recomandate pentru izolarea bacililor difterici:
- geloza sange
- Tinsdale (cu telurit de K) (cel mai bun mediu pt. izolarea C.dipht. in specimene clinice)
- mediu Guendel-Tietz (cu sange si telurit)
- tub cu mediu Loeffler - mediu selectiv si pt. stocare
Caractere morfologice
- frotiu colorat Gram si Del Vecchio (albastru de metilen alcalin)
- bacili polimorfi, drepti sau usor incurbati, cu capete maciucate, dispusi in V, L, Y si frecvent in palisade, aspect de litere chinezesti
- Gram+ la limita, prezinta INEGALITATE TINCTORIALA datorita incluziilor de volutina (corpusculi metacromatici) dispuse predominant polar.
Caractere de cultura
* pe geloza sange - colonii alb-gri perle
- se stabilesc pe baza examinarii culturii la 24-48h pe geloza sange
C.d. gravis - colonii plate, margni crenelate, striatii radiale si suprafata granulara, consistenta friabila, greu emulsionabile
C.d. mitis - colonii de marmie variabila convexe, cu margine circulara, suprafata lucioasa, consistenta cremoasa. Prin invechire devin plate si mai granulare. Au tendinta de a produce o zona mica de beta hemoliza in jur.
C.d. intermedius - marime variabila a coloniilor, aspect plat, centrul usor mamelonat, colonii alb-gri, cu suprafata genulara sau lucioasa si margini circulare mai transparente.
Pe mediu Tinsdale - colonii mici negre inconjurate de un halou brun.
Pe mediu Loeffler:
- polimorfism accentuat pe mediu Loffler
- semicremoasa, granulara (alte specii lucioase, cremoase)
Pe Mediu Gundel-Tietz (geloza sange cistina telurit)
C.d. gravis: colonii plate, margini crenelate, striatii radiale, suprafata granulara, consistenta friabila, greu emulsionabile, negre»_space; MARGARETA
C.d. intermedius - colonii mijlocii si mici, aspect plat, centru usor mamelonat, margini circulare, suprafata granulara sau lucioasa, negre cu margini mai transparente, semicremoase.
C.d. mitis - colonii convexe, suprafata lucioasa, consistenta cremoasa
Pe mediu lichid:
- gravis - pelicula, depozit, bulion limpede
- intermedius - inel la suprafata, depozit, tulbura usor mediul
- mitis - depozit, tulbura uniform
- dg. prezumtiv
Testele de dg. prezumtiv utilizate pt. diferentiere C. diphteriae/ ulcerans si pseudotuberculosis de alte specii de corynebacterii sunt: testul producerii de cistinaza pozitiv si testul pirazinamidazei negativ. - confirmarea dg. - se face pe baza caracterelor biochimice
- test de evidentiere a toxigenezei + testarea imunitatii antidifterice
MO: granule metacromatice in bacteriile colorate cu albastru de metilen
Identificare: teste biochimice si demonstrarea prezentei exotoxinei
Gold standard pentru detectia toxinei difterice: testul Elek test de imunodifuzie in vitro
Difteria
- boala infectioasa determinata de toxina elaborata de tulpinile toxigene ale genului Corynebacterium
- afecteaza tractul respirator superior si tegumentul
Corynebacyerium diphteriae - diagnsotic de lab.
Recoltare si transport
Recoltare+transport
Pt. localizarea respiratorie se recolteaza tampoane de la nivelul faringelui si nazal. Daca exista pseudomembrane, se desprinde marginea mb. si se recolteaza serozotatea de sub aceasta.
Pentru localizarea cutanata se recolteaza probe de la nivelul leziunii
In total se recolteaza 3 tampoane.
Se transporta cat mai repede (daca dureaza mai mult de 2 h se foloseste mediu de transport)
Corynebacyerium diphteriae - diagnsotic de lab.
- cele trei tampoane cu produs patologic
Cele trei tampoane recoltate din produsul patologic se prelucreaza astfel:
I) frotiuri pt. caractere morfologice
II) se insamanteaza pe mediu de imbogatire cu ou, cistina si telurit (OCST)
III) se insamanteaza pe medii de cultura pentru examinarea caracterelor de cultura.
Izolarea primara se realizeaza prin insamantarea pp pe medii de cultura selective si neselective.
Mediile de cultura recomandate pentru izolarea bacililor difterici:
- geloza sange
- Tinsdale (cu telurit de K) (cel mai bun mediu pt. izolarea C.dipht. in specimene clinice)
- mediu Guendel-Tietz (cu sange si telurit)
- tub cu mediu Loeffler - mediu selectiv si pt. stocare
Corynebacyerium diphteriae - diagnsotic de lab.
Caractere morfologice
Caractere morfologice
- frotiu colorat Gram si Del Vecchio (albastru de metilen alcalin)
- bacili polimorfi, drepti sau usor incurbati, cu capete maciucate, dispusi in V, L, Y si frecvent in palisade, aspect de litere chinezesti
- Gram+ la limita, prezinta INEGALITATE TINCTORIALA datorita incluziilor de volutina (corpusculi metacromatici) dispuse predominant polar.
Corynebacyerium diphteriae - diagnsotic de lab.
Caractere de cultura
Caractere de cultura
- se stabilesc pe baza examinarii culturii la 24-48h pe geloza sange
C.d. gravis - colonii plate, margni crenelate, striatii radiale si suprafata granulara, consistenta friabila, greu emulsionabile
C.d. mitis - colonii de marmie variabila convexe, cu margine circulara, suprafata lucioasa, consistenta cremoasa. Prin invechire devin plate si mai granulare. Au tendinta de a produce o zona mica de beta hemoliza in jur.
C.d. intermedius - marime variabila a coloniilor, aspect plat, centrul usor mamelonat, colonii alb-gri, cu suprafata genulara sau lucioasa si margini circulare mai transparente.
Pe mediu Tinsdale - colonii negre inconjurate de un halou brun/ cafeniu bine delimitat
Testarea toxigenezei
- in vivo
- pe animal (cobai)
- pe culturi celulare
Reactia in vivo se bazeaza pe proprietatea toxinei difterice de a produce efecte toxice la animale inalt susceptibile (iepuri, cobai) sau pe culturi celulare. - in vitro:
- test Elek conventional sau modificat: imunodifuzie (cultura insamantata si ser antidifteric cu antitoxina»_space; linii de precipitare)
- imunostrip
- Elisa
Toxina difterica
- dermonecrotica
- leziuni la nivelul miocardului
- leziuni la nivelul suprarenalelor
- leziuni degenerative ale sistemului nervos
*toxina difterica e neutralizata de serul antidifteric
Anatoxina difterica
toxina inactivata prin formol si caldura
isi pastreaza capacitatea antigenica, dar o pierd pe cea toxica
Difteria - fenomene locale
- falsa membrana cu sangerare la desprindere
- adenopatie, gat proconsular
- exudat recoltat de sub falsa membrana
C. diphteriae - caractere de cultura pe geloza sange
- aspecte similare cu Guendel-Tietz
- caracteristic: coloniile au culoarea alb-gri perle
- gravis - colonii MARGARETA, suprafata granulara, friabile
- intermedius - plate, uneori acuminate, margini circulare, suprafata granulara, consistenta semicremoasa
- mitis - colonii circulare, convexe, lucioase, cremoase
Specii Corynebacterium
- diphteriae cu 4 biotipuri
- gravis
- mitis
- intermedius
- belfanti (netoxigen)
- ulcerans
- pseudotuberculosis (nu la om)
Antitoxina
anticorpi anti toxina difterica
