Conclusion-Principales techniques

Question 1

Citer les techniques de concentration des protéines

Answer 1

• electrophorèses
• chromatographie : sur gel (SEC), échangeuse d’ions (IEX), phase réverse (RP)
• dialyse
• ultrafiltration (UF)
• diafiltration : continue et discontinue
• lyophilisation
• précipitation
• cristallisation

Question 2

Citer les techniques pour quantifier les macromolécules

Answer 2

• spectroscopie d’absorption

- colorimétrie (test de Bradford/ test de Lowry/ test BCA)

Question 3

Citer les différentes électrophorèses

Answer 3

• gel d’agarose (ADN)
• SDS-PAGE (ARN)
• électrophorèse 2D
• isofocalisation électrique (IEF)
• DIGE

Question 4

Donner les techniques de séquençages des peptides

Answer 4

• en N-ter : FDNB / Dansyl chloride / Dabsyl chloride
• dégradation d’Edman
• hydrolyse et séparation des aa pour refaire la séquence

Question 5

Donner l’unique technique vu en cours d’analyse des peptides

Answer 5

spectroscopie de masse :

• ESI MS
• MALDI MS
• MS/MS tandem

Question 6

Citer les différentes techniques pour mesurer l’activité enzymatique et en quoi elles consistent

Answer 6

• test continu (prop. spectro de S et de P)
• test continu couplé (pas de prop spectro -> ajout NADH)
• test discontinu (arret manuel, séparation S de P)
• test radiométrique (isotope stable + comptage cpm)

Question 7

Donner les 3 techniques de production de protéines

Answer 7

• enzymes de restrictions
• vecteurs de clonage (plasmide pBR322 et pUC18)
• PCR pour amplifier les produits

Question 8

Citer les différentes techniques de clonage et leur utilisation

Answer 8

• enzyme de restrictions
• TA cloning (ajout A en 3’)
• TOPO TA cloning (ajout A en 3’ + ligation par les topoisomérases)
• LIC ligation : hybridation 12 pdb du vecteur avec l’insert
• Gateway recombinaison : recombinaison chromosomique (virus + BAC)

! Mettre des étiquettes pour suivre les produits !

Question 9

Citer la technique d’expression des protéines in vivo

Answer 9

la transformation:

• électroporation
• choc thermique

Question 10

Donner les 4 modèles utilisés pour l’expression de protéines in vivo

Answer 10

• E.Coli
• S.Cerevisiae (ou Pastoris)
• cellules d’insectes infectées par un virus
• cellules de mammifères (cellules embryonnaires humaines)

Question 11

Donner la méthode de préparation d’extraits protéiques et ses différentes techniques

Answer 11

la lyse :

• chimique (détergent)
• enzymatique (lysozyme / ADNase I ou Benzonase)
• mécanique (sonification / pression / billes de verres)