Chromato

Question 1

De quoi dépend la solubilité de protéines ?

Answer 1

De la concentration en sels dans la solution ainsi que de l’hydophobicité de la protéine.

Question 2

A quoi peut servir une dialyse ? 3 trucs

Answer 2

Purifier une protéine par séparation de taille
Changer un tampon
Concentrer des macromolécules

Question 3

Quels sont les deux principes utilisés lors des chromatographie ?

Answer 3

Adsorption

tamis

Question 4

Sur un chromatogramme c’est quoi tr ? tm ?

Answer 4

Tr est le temps de rétention, qualitatif

Tm est le temps que met une protéine à passer la colonne sans être retenue

Question 5

Qu’est-ce que le coefficient de distribution d’une chromato ?

Answer 5

C’est un coefficient K qui permet d’évaluer le rapport entre concentration dans la phase stationnaire et phase mobile.

Question 6

Quelle est l’équation fondamentale de la chromatographie ?

Answer 6

Ve = Vm + Kd * Vs

Question 7

Qu’est ce que le facteur de rétention alpha ?

Answer 7

Il s’agit d’un facteur qui évalue la position de deux pics adjacents sur le chromatogramme: Il est égal à tr2/tr1

Question 8

Que permet d’évaluer la sélectivité lors d’une chromato ?

Answer 8

Permet d’évaluer la capacité d’un système à éluer deux solutions différentes à des temps Ve assez différentes

Question 9

Que signifie un pic étroit ? Pour quelle grandeur ces pics étroits sont significatifs ?

Answer 9

un pic étroit signifie que la colonne est efficace : c’est donc une mesure de l’éfficacité

Question 10

Qu’est ce qu’un plateau théorique ?

Answer 10

C’est le plus petit volume ou il y a un équilibre entre phase stationnaire et mobile, et donc ou K’ est réalisé.

Question 11

dans un plateau théorique à quoi est égale le volume d’élution Ve ?

Answer 11

à N * Vh (volume de phase mobile du plateau)

Question 12

Quelle relation lie nombre de plateau, temps de rétention et épaisseur des pics ?

Answer 12

Plus le nombre de plateaux théoriques est grand plus le pic est étroit.
Plus le temps de rétention est long plus le pic est large.

Question 13

Comment peut on augmenter la résolution d’une chromatographie ?

Answer 13

On peut allonger la longueur de la colonne dans le but d’voir plus de plateaux théoriques
On peut aussi changer les conditions expérimentales

Question 14

Si le pH > pI alors

Answer 14

chargé négativement

Question 15

Comment éluer une colonne d’interaction hydrophobe ?

Answer 15

Avec un tampon de force ionique décroissante, ou avec des détergents

Question 16

Définir hydrophobicité

Answer 16

Capacité qu’ont des molécules non polaires de s’associer entre elles pour limiter l’exposition de leurs régions hydrophobes à l’eau.

Question 17

Quels sont les deux adsorbants disponibles pour des chromatographies d’affinité ?

Answer 17

à spectre large : spécifiques d’une classe de protéines

spécifiques : se fixent covalentement à la protéine à purifier

Question 18

Quelles méthodes d’élution sont à disposition pour les chromatographies d’affinité ?

Answer 18

Changement de tampon
Changement de pH
Compétition avec une autre protéine

Question 19

C’est quoi l’étiquette MBP ?

Answer 19

C’est une étiquette qui se couple très facilement à l’amylose et qui augmente la solubilité des protéines de fusion

Question 20

Donner 4 avantages de l’étiquette GST

Answer 20

On peut l’utiliser dans tous les systèmes d’expression
Facilement détectée en Western
Site de coupure pour protéase dessus
Stabilise la protéine recombinante

Question 21

Quelle forme est optimale pour la résolution dans une chromatographie par gel filtration ?

Answer 21

Longue et étroite

Question 22

Définir le coefficient de partage Kd

Answer 22

(Ve-V0)/(Vt-V0-Vgel) avec V0 = Volume de solvant entre les billes

Question 23

Définir le coefficient d’avancement Kav

Answer 23

Ve-V0/Vt-V0

Question 24

Qu’est ce que la filtration sur gel permet de découvrir concernant la structure des protéines ?

Answer 24

elle permet de déterminer la structure oligomérique des protéines.D’abord on trouve la mass de la protéine totale puis dénaturation puis masse des SU

Question 25

de quels tests simples et rapides dispose on pour vérifier la présence de la protéine à purifier ?

Answer 25

Test enzymatique si enzyme sinon SDS page ou Western

Question 26

Dire ce que veut dire capture purification intermédiaire et polissage

Answer 26

Capture : isoler concentrer et stabiliser la protéine d’interêt
Purification intermédiaire : le gros de la prot est purifié
Polissage : on vire les contaminants résiduels (haute résolution et rendement)

Question 27

Donner des ex de méthodes de capture

Answer 27

Affinité, EI, sels

Question 28

Donner des ex de méthodes de Purif inter

Answer 28

Hydrophobe

Question 29

Donner des ex de méthodes de polissage

Answer 29

Gel filtration, traitement aux sels

Question 30

Sur quoi se base la purification avec les anticorps ?

Answer 30

Sur la très forte affinité de la prot A et G avec le domaine Fc des IGG

Question 31

Comment marche purif anticorps ?

Answer 31

On couple A et G avec un anticorps spécifique à la protéine qu’on veut purif, puis inucub, centri, et élution avec tampon de charge SDS page

Question 32

C’est quoi TAP tag ?

Answer 32

Une purif avec deux étiquettes qui permettent de virer bon nombre de faux positifs

Question 33

Donner les trois étapes du TAP tag

Answer 33

Liaison de la protéine A aux IgG et élution
liaison CBP à la calmoduline avec C++
élution en présence d’EGTA