Centrifugation Flashcards
Qu’est ce qui permet de simplifier la manipulation l’expression l’isolation et de gènes ?
L’ajoute d’une étiquette de caractéristiques connues
Que faut-il ajouter au lysat pour stabiliser les protéines ?
agents réducteurs
agents chélateurs de cations
inhibiteurs de protéases
agents stabilisateur
Que faut-il faire si la protéine à purifier se trouve dans une organelle ?
Il faut lyser mécaniquement les cellules dans un tampon isotonique pour préserver l’intégrité de l’organelle; puis centri différentielle
Qu’indique le Champ centrifuge Relatif RCF ?
Il nous indique le nombre de g nécessaires à sédimenter une particule.
De quoi parle la loi de Stokes ?
Décrit les forces de friction dans la solution qui s’opposent au mouvement de la particule.
A quoi est directement proportionelle la vitesse de sédimentation ?
Au volume de la particule
Au champ centrifuge
A la diférence de densité entre particule et solution
Inversement au coeff de friction
Quelle condition doit être respectée pour permettre une sédimentation ?
La densité de la particule doit être supérieure à celle de la solution.
Quel est le principe derrière la sédimentation différentielle ?
Se base sur les différences de vitesse de sédimentation entre les particules qui diffèrent par densités et dimensions.
Entre une particule plus dense et moins dense; laquelle sédimentera plus vite ?
La plus dense
Qu’est ce qu’une centrifugation par gradient de densité ?
En gros on utilise une solution avec des densités différentes, évitant les problèmes de co sédimentation puisque les particules dn’iront pas au fond du tube mais dans la couche de densité égale.
Quelle condition est à remplir concernant le lysat dans les centrifugation par gradient de densité ?
La densité de l’échantillon (lysat cellulaire) doit être toujours plus basse que la densité mineure du gradient (celle du haut).
Qu’est ce qu’une centrifugation de zone ?
L’échantillon est déposé sur un gradient de pente faible : chaque type de particule traverse le gradient à une vitesse dépendant de son coeff de sédimentation, faisant des bandes bien distinctes.
Pour quoi est pratique les centrifugation de zone ?
Pour séparer des organelles ou des macromolécules qui diffèrent en taille.
Quel inconvénient pour les centri en zone et que peut on faire pour y remédier ?
Inconvénient : petite quantité d’échantillons seulement peuvent être chargées. On peut y remédier en utilisant un rotor zonal.
Qu’est ce que les centrifugation à l’équilibre de sédimentation /isopynique ?
L’échantillon est posé sur un gradient de forte pente ou la densité majeure du gradient est supérieure à celle de la molécule la plus dense. Chaque particule traverse le gradient avec une vitesse dépendant de sa densité.
