Clonación y transformación

Question 1

¿Por qué clonar?

Answer 1

Para aislar células con propiedades específicas (las céulas no especializadas tienden a dominar el cultivo)

Question 2

Clonar es fácil tanto para cultivos primarios como para líneas celulares continuas

Answer 2

FALSO: clonar es fácil para líneas continuas y dicidil para cultivos primarios

Question 3

En qué tipo de superficie se pueden clonar células adherentes

Answer 3

Cajas petri
Placas multipozos
Botellas de cultivo

Question 4

Por qué utilizar una matriz viscosa para clonar por suspención?

Answer 4

La matriz viscosa (Methocel) asegura que las células hijas permanezcan en las colonias.
Células hamatopoyéticas se clonan por suspención

Question 5

Cuál es el fundamento de clonar en suspención?

Answer 5

Observar que las células diluidas a cierta densidad pueden formar colonias

Question 6

Por qué es necesario tripsinizar a las células y como terminas la reacción de la tripzina ?

Answer 6

Para asegurar una suspención homogénea, para terminar la reacción, es necesaro agregar SFB (5mL)

Question 7

Cual es el protocolo para clonar por dilución?

Answer 7

1. Tripsinizar las células
2. Contar las células y diluir a 1x105 células/mL
3. Diluir las células a 10 células/mL
4. Cultive 0.1 mL en una placa de 96 pozos
5. Espere una semana, esperar que las clonas sean visibles

Question 8

Razones para tener baja eficiencia de sembrado

Answer 8

1. Pérdida por filtración

2. Los factores derivados solubles de las células están muy diluidos

Question 9

La selección de un medio enriquecido, añadir hormonas, un sustrato adecuado y el uso de un medio condicionado son utilizados para:

Answer 9

Incrementar el crecimiento clonal

Question 10

Las células nodrizas son:

Answer 10

Son células que simulan altas concentraciones celulares, pueden proveer de nutrientes, factores de crecimiento y matriz extracelular

Question 11

Son características del Methocel

Answer 11

Las colonias son mantenidas juntas, no hay impurezas y es fácil de manipular.
Las colonias forman una interface entre el methocel y la capa de agar

Question 12

Protocolo para Methocel

Answer 12

1. Prepara una capa de 0.6 % Agar
2. Diluir de Methocel con medio 1x, mantener en hielo
3. Preparar las diluciones celulares
4. Adicionar 40 uL de cada dilución a los tubos marcados + 4 mL de Methocel, Vortexear
5. Usar una jeringa y adicionar 1mL de cada dilución a las placas
6. Incubar hasta que las colonias se formen

Question 13

Cómo se aislan las células adherentes?

Answer 13

Uso de tripzina (placa multipozos)

Uso de anillos (cerámica, acero, plástico) para separar colonias (en caja petri)

Question 14

Proliferación v/s diferenciación

Answer 14

Proliferación
La entrada en el ciclo de división celular es regulada por señales ambientales.
Factores de crecimiento (EGF, PDGF o FGF) son necesarios

Diferenciación
Crecimiento inhibido en cultivos de alta densidad.
Proteínas intracelulares como p53 y Rb inhiben la proliferación.

Question 15

Evento o serie de eventos dependientes que promueven la inestabilidad genética

Answer 15

Transformación

Question 16

Al transformar células, qué propiedades de la célula son alteradas?

Answer 16

Velocidad de crecimiento, forma de crecimiento, producción de productos especializados, longevidad y tumorigenicidad

Question 17

Son métodos para transformar:

Answer 17

Introducción artificial de DNA o transferencia de DNA en células mamíferas (transfección)
la infección con virus o trasnfección de genes mutantes de ras, radiación ionizante o carcinógenos químicos.

Question 18

La inmortalización, el control aberrante del crecimiento (la pérdida de la inhibición por contacto) y la malignidad (crecimiento de tumor invasivos) son :

Answer 18

Los tres principals clases de cambios fenotípicos

Question 19

Las líneas celulares finitas humanas son genéticamente inestables mientras que las líneas celulares de ratón son genéticamente estables y se transforman dificilmente

Answer 19

FALSO

Question 20

¿Cómo se determinan las aberraciones cromosómicas?

Answer 20

Por el ensayo de intercambio de cromátides hermanas, en el conteo de cromosomas y el análisis del cariotipo.

Question 21

sufren cambios después de la 12va generación

Answer 21

Las células de roedores

Question 22

Para que las células de ratón permanezcan sensibles a la inhibición por contacto se deben de

Answer 22

Mantener a una densidad baja y no se les permite llegar a la confluencia por un periodo de tiempo largo

Question 23

Los genes de senescencia en líneas celulares finitas controlan negativamente el ciclo celular y su progresión

Answer 23

VErdadero

Question 24

Inmortalización involucra tanto inactivación de senescencia y reguladores del ciclo celular como:

Answer 24

pRb y p53

Question 25

Permite un tiempo de vida extendido y restringe la actividad de genes de vigilancia del DNA,
Incrementa la inestabilidad genómica y
Incrementa las oportunidades para las mutaciones

Answer 25

Inmortalización

Question 26

Agentes virales para inmortalizar células y cuáles genes afectan:

Answer 26

Virus SV 40, Adenovirus (E 1a), VPH E6 y E7, Epstein-Barr virus (EBV)
pRb, p53 y p16 (principalmente)

Question 27

Son subunidades de la telomerasa

Answer 27

El componente de RNA (hTR)–> es expresada en tejido normal y maligno
y la subunidad proteica catalítica (hTERT) –> expresada en tumores, líneas celulares germinales y linfocitos activados

Transfectar células con hTERT extiende la vida media de la línea celular

Question 28

Son características de un control alterado del crecimiento

Answer 28

·líneas celulares tumorigénicas lo muestran.
·baja dependencia del suero o de factores de crecimiento.
·clonas con una alta eficiencia de sembrado
“·control autónomo del crecimiento: secretan sus propios mitógenos y sus receptores” –> Producen Interleucinas 1, 2 y 3 junto con factores estimuladores del crecimiento de colonias (CSF)

Question 29

Por qué las células transformadas tienden a crecer en suspensión?

Answer 29

La transformación conduce a modificaciones en la glucoproteínas de superficie y las moléculas de adhesión.
Conduce a una pérdida del reconocimiento célula- célula, desorganiza los patrones de crecimiento, la pérfida de la inhibición por contacto y la limitación de la proliferación por densidad.

Question 30

Están permanentemente activos y son difíciles de manejar además que sobreexpresan de genes que regulan la transducción de señales (cinasa Src ) o controladores de la transcripción (myc, fos y jun)

Answer 30

Oncogenes

Question 31

Tienen una tasa de crecimiento alta, reducida dependencia al anclaje, pronunciada aneuploidia e inmortalización

Answer 31

Tumores malignos

Question 32

Cuando las células han desarrollado la capacidad de generar tumores invasivos implantados in vivo en huéspedes autológos o si son trasplantadas como xenotransplantes en un animal deprivado de inmunidad se dice que es:

Answer 32

Tumorigenicidad por malignidad

Question 33

Son características de Tumorigenicidad por angiogénesis

Answer 33

Células secretan factores (VEGF, EGF-2 y angiogenina) capaces de la neovascularizar

Las células tumorales producen enzimas proteolíticas que ayudan a las células tumorales a no adherirse a ninguna superficie (invasión a otros tejidos)