Chapitre 4 : Etudes fonctionnelles Flashcards
Quel est le but des études fonctionnelles par radioactivité ?
De suivre des synthèses de molécules biologiques mais aussi de localiser ces biomolécules dans les cellules
Qu’est-ce qu’un précurseur radioactif ?
Précurseur de molécules biologiques qui ont incorporé des radio-isotopes
Donner un exemple précis de précurseur radioactif
Le Tritium : il peut se substituer à l’hydrogène dans les précurseurs de molécules biologiques
Quel est le précurseur radioactif des protéines ?
La Leucine Tritiée
Quel est le précurseur de l’ARN ?
L’Uridine Tritiée
Quel est le précurseur radioactif de l’ADN ?
La Thymidine Tritiée
Quelles sont les 2 techniques de radioactivité ?
L’Autoradiographie
L’expérience du pulse-chase
Quel est le principe de l’autoradiographie ?
Incorporer un précurseur radioactif dans les cellules, émulsion photographique > chambre noire
Comment se réalise l’expérience du pulse-chase ?
Période de pulse courte, cellules incubées en présence de précurseurs radioactifs = synthèse de molécules biologiques radioactives
Période de chase : on élimine les précurseurs : observer le transport des molécules bio radioactives
Quel est le principe des études fonctionnelles après manipulation génétique ?
Modifier l’expression d’un gène ou bien la structure d’une protéine
Que nécessite la manipulation génétique ?
L’introduction de macromolécules dans la cellule = transfection
Donner des exemples de molécules à transfecter
Protéines normales couplées à un fluorochrome
Les ARN interférents
ADN
De quoi est composée la protéine de fusion ?
De protéine à étudier + étiquette
Donner un exemple connu d’une protéine fluorescente
La protéine GFP contient 228 AA, extraite d’une méduse
Quelles sont les 4 méthodes de transfection ?
Méthodes physiques
Fusion membranaire
Endocytose de complexes chimiques
Propulsion de micro projectiles recouverts d’ADN
Quelles sont les méthodes physiques ?
Microinjection
Electroporation
En quoi consiste la micro injection ?
Transférer les macromolécules directement dans une cellules grâce à une micropipette en verre
Quel est l’inconvénient de la micro injection ?
L’injection est individuelle pour chaque cellule
Qu’est-ce que l’électroporation ?
Formation de pores transitoires dans la MP suite à un choc électrique puis réparation spontanée de la MP
En quoi consiste la fusion membranaire ?
Lipofection = utiliser des liposomes, les molécules à transfecter sont introduites dans les liposomes puis fusion des liposomes avec la MP
Qu’est-ce que les liposomes ?
Des vésicules artificielles présentant une bicouche lipidique
Comment s’appelle le principe des liposomes ?
La lipofection
Qu’est-ce que l’endocytose de complexes chimiques ?
On utilise des molécules chargées + comme le DEAE-dextran ou le calcium qui se lient naturellement aux charges négatives des acides nucléiques = formation de complexes
Qu’est-ce que la propulsion ?
On utilise un canon à ADN qui permet d’envoyer à très grande vitesse des billes d’or ou de tungstène recouvertes D’ADN sur les cellules, la très grande vitesse permet de traverser la MP
Quel est l’objectif de l’étude des mouvements ou interactions moléculaires de cellules
Suivre des mouvements moléculaires dans les cellules vivantes
Quelles sont les 2 méthodes des études des mouvements ?
FRET
FRAP
Quel est le but du FRET ?
Mesure de l’interaction entre 2 protéines
Quel est le principe du FRET ?
2 fluorochromes différents sont fixés à 2 protéines différentes
Ces fluorochromes présentent des spectres différents mais chevauchants
Quel est le but du FRAP ?
Mesure de la vitesse de diffusion moléculaire dans les cellules vivantes. Obtention d’une zone blanche
Quel est le principe du FRAP ?
Récupération de la fluorescence après photo-blanchiment (laser)
