Chapitre 3 : Microscopie Flashcards
Quelle est la taille de la plus petite particule détectable à l’œil nu ?
100 μm/ 0,1 nm
Quel est l’avantage important du microscope optique ?
La lumière est relativement peu destructrice
Quel est l’inconvénient du microscope optique ?
La faible résolution (ordre de 200 nm)
Quels sont les + petits éléments détectables au microscope optique ?
Les bactéries et les mitochondries
Quelles sont les 2 lentilles de verre dans le microscope à transmission ?
L’objectif et l’oculaire
Quel est l’avantage du microscope à fluorescence ?
La détection reste possible même pour une faible quantité de molécules fluorescentes
= Grande sensibilité
Quels sont les exemples de la microscopie à fluorescence ?
DAPI : ADN, fluorescence bleue
LysoTracker : lysosomes, fluorescence rouge
MitoTracker : mitochondries, fluorescence verte
Quel est l’avantage d’un microscope électronique ?
Sa résolution (2nm) = 100x supérieure à celle MO
= repérer l’ultrastructure
Quel est l’inconvénient du microscope électronique ?
La préparation est complexe et fastidieuse
Quelle est la taille possible d’un MET ?
2m de hauteur
Quels sont les 2 jeux de lentilles électromagnétiques dans le MET ?
L’objectif et le projecteur
Quelle est la couleur des images en MET et pourquoi ?
Les images sont forcément en noir et blanc :
Soit les électrons peuvent traverser l’objets : on obtiendra une zone claire
Soit la structure de l’objet entraîne une déviation des électrons : on obtiendra une zone sombre
Quelle est la différence du MEB ?
Le faisceau d’électrons est condensé en un foyer très précis qui peut être déplacé grâce à un générateur à balayage, ces électrons arrachent des électrons à l’objet qui vont être détectés et transformés en une image
Quelles sont les 5 étapes de la préparation en ME ?
Fixation Déshydratation Inclusion Coupe Obtention du contraste
Qu’est-ce que la fixation ?
Objectif : tuer les cellules tout en maintenant les constituants
Donner des exemples de fixateurs
Le formaldéhyde
Le glutaraldéhyde
Le tétroxyde d’osmium
Qu’est-ce que la déshydratation ?
Elle élimine l’eau et prépare l’inclusion
Eviter des déformations si le vide est nécessaire
Quelle est la méthode de la déshydratation ?
Plonger la préparation dans des bains d’éthanol successifs en augmentant la concentration en éthanol au fur et à mesure
Qu’est-ce que l’inclusion ?
Afin d’obtenir des tranches fines, avant de les couper, on les inclut dans des matériaux plus durs
Donner des exemples de matériaux intervenant dans l’inclusion
La paraffine (MO) et la résine (ME)
Quelle est la taille des coupes ?
1 à 10 μm pour MO
50 à 100 nm pour ME
Comment se réalisent les coupes ?
Grâce à un microtome qui présente une lame aiguisée :
en acier (MO)
en verre ou diamant (ME)
puis les coupes sont placées :
lame de verre (MO)
grille de cuivre (ME)
En MO, quelles sont les 2 possibilités d’obtenir le contraste ?
La réfringérence naturelle des cellules
Coloration par fluorochrome ou colorants
Quels sont les 2 types de colorants en MO ?
basiques qui se lient aux structures acides de la cellule
acides qui se lient aux structures basiques de la cellule
En MET, quelle est la méthode de coloration ?
On réalise une imprégnation des cellules ou des tissus par les métaux lourds
Donner des exemples de métaux lourds
Sels de plomb
Sels d’argent
Sels d’uranium
Tétroxyde d’osmium
En MEB, quelle est la technique de coloration ?
Il ne faut pas que les électrons traversent l’objet donc vaporisation par une fiche couche de métaux lourd
Donner des exemples de métaux pour une vaporisation
Or
Platine
Palladium
Quel est l’intérêt de l’immunocytochimie ?
D’identifier de manière spécifique des protéines dans les tissus et les cellules
Quel est le principe de l’immunocytochimie ?
De faire reconnaître des protéines de type antigène par des anticorps qui sont couplés à des molécules détectables
Quels sont les différents types de marquage cellulaire ?
Le Marquage direct (1 anticorps = 1 antigène)
Le Marquage double (2 anticorps = 2 antigènes)
Le Marquage indirect (1 anticorps primaire contre 1 antigène + anticorps secondaires)
En microscopie fluorescente, à quoi est couplé l’anticorps ?
A un fluorochrome :
FITC : fluorescéine
TRICT : rhodamine
En ME à quoi est couplé l’anticorps ?
A des métaux :
L’or colloïdal
Le fer de la ferritine
