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ADN recombinant > Ch.2 Les techniques autres que la restriction d'ADN pour produire des segments > Flashcards

Ch.2 Les techniques autres que la restriction d'ADN pour produire des segments Flashcards

1
Q

Quels sont les autres méthodes (que le ch. 1) disponibles pour générer des fragments d’ADN qui seront utilisés pour le clonage?

A
  • Synthèse chimique d’ADN
  • Synthèse d’ADNc
  • PCR
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Q

Comment sont d’abord obtenus les fragments lors des techniques de séquencage de masse?

A

Par bris mécanique

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3
Q

Quelles sont les conditions pour la synthèse chimique d’oligonucléotides?

A

effectuée en phase solide, solvant non-aqueux

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4
Q

Vrai ou faux
Synthèse d’oligonucléotides

a) La synthèse est effectuée de 5’ -> 3’
b) La chaine d’ADN en croissance est attachée à la surface de billes contenues dans les puits ou sur une plaque de silice
c) La longueur minimum des oligonucléotides est de 250 (nt)
d) La synthèse est rapide
e) efficacité de couplage est <90%
f) Les oligonucléotides sont tous phosphorylé en 5’
g) Seulement la synthèse d’ADN est possible

A

a) faux, 3’->5’
b) vrai
c) faux, maximum
d) vrai 3min/nt
e) Faux, 99.5%
f) faux pas phospho
g) Faux, ARN

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5
Q

Pourquoi n’est-il pas possible de faire une synthèse d’oligonucléotide plus longue (limite)?

A

parce que l’efficacité de couplage n’est pas 100%

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6
Q

La synthèse d’ARN est souvent utile pour…

A

Inactiver un gène, inhiber une expression

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7
Q

Pourquoi les solvants d’un synthétiseur d’ADN sont sous atmosphère d’hélium ou d’argon?

A

Sensible à l’oxydation et à l’humidité

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8
Q

Le nucléoside ajouté à chaque cycle contient quoi à ses extrémités?

A

5’ OH = groupement protecteur

3’ OH = groupement activateur

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9
Q

À quoi sert le groupement protecteur?

A

empêcher les différentes molécules de nucléoside dans le réactif de réagir entres elles

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10
Q

Quelles sont les quatres étapes d’un cycle de synthèse d’un oligonucléotide?

A
  • Détritylation
  • Activation et addition
  • Capping
  • Oxydation
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11
Q

Vrai ou faux

Le premier nucléoside est fixé au support par un lien covalent

A

Vrai

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12
Q

Par quoi le groupement 5’ OH est-il protéger?

A

DMT

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13
Q

Les groupement NH2 sont…

A

protégés avec des groupements chimiques

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14
Q

Qu’arrive-t-il durant la détritylation?

A

Le groupement DMT est libérer de l’extrémité 5’

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15
Q

Qu’arrive-t-il durant l’étape d’activation?

A

l’amine tertiaire fixée sur le groupement phosphoramidite du deuxième nucléoside est protoné par le tétrazole

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16
Q

Qu’arrive-t-il durant l’étape d’addition?

A

Le groupement 5’ OH du premier nucléoside attaque le groupement phosphite trivalent du deuxième nucléotide -> élimination de l’amine tertiaire

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17
Q

Qu’arrive-t-il pendant l’étape de capping?

A

Acétilation des groupements 5’ OH des chaines qui n’ont pas subi la réaction d’addition

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18
Q

Qu’arrive-t-il durant l’étape d’oxydation?

A

Le groupement phosphite trivalent est oxydé en phosphate pentavalent par I2 + H2O, le cycle d’addition du troisième nucléoside peut commencer

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19
Q

Vrai ou faux

Il est possible d’ajouter plus d’un nucléoside dans un cycle de manière à former un oligo dégénérer

A

Vrai

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20
Q

Que fait le groupement benzoide?

A

protège grp amine

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21
Q

Quelles sont les particularités des monomères utilisés pour synthétiser des oligonucléotides?

A
  • soluble dans des solvants non-aqueux
  • Seule réaction possible = addition séquentielle 3’-> 5’
  • Fonctions aminées des base protégées
  • Groupement 5’ OH protégé
  • 3’ OH couplé avec le groupement hautement réactif phosphoramidite, atome O du phosphite masqué par un groupement protecteur b-cyanoéthyl
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22
Q

Vrai ou faux

À la fin de la synthèse tous les groupements protecteurs sont partis

A

Faux, grp benzoyle, isobutyryle, DMT et b-cyanoéthyl encore présent

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23
Q

Vrai ou faux

Lorsque la taille de l’oligo augmente, le rendement augmente aussi

A

Faux contraire

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24
Q

Quel groupement n’est pas décroché de l’oligo à la fin et pourquoi?

A

Dernier groupement DMT

car il facilite la purification par chromatographie en phase inverse

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25
Q

Comment l’oligo est décrocher du support?

A

Par addition de NH4OH concentré à température pièce

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26
Q

Comment les groupements protecteurs sont décrochés?

A

Par addition de NH4OH à 50 degré pendant 8 heure

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27
Q

Quelles méthodes peuvent être utilisées pour purifier l’oligo?

A

Chromatographie sur gel d’exclusion, échange d’ions ou phase inverse ou électrophorèse sur gel de polyacrylamide

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28
Q

Vrai ou faux

Le contrôle de la qualité d’un oligo est effectuer par spectrométrie de masse

A

Vrai

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29
Q

Vrai ou faux

On peut synthétiser des oligonucléotides directement sur la surface de puces d’ADN

A

Vrai

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30
Q

Pourquoi est-il utile de synthétiser des gènes plutôt que d’utiliser des gènes naturels?

A
  • Optimiser la production d’une protéine
  • Optimiser une protéine thérapeutiques en testant des variants du gène qui l’encode afin d’améliorer sa performance, ou pour identifier les régions importantes pour la fonction d’une protéine
  • pour obtenir de manière sécuritaire des gène
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31
Q

Un gène synthétique est construit à partir ______ qui se chevauchent en utilisant des outils ________

A

oligonucléotides, bioinformatique

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32
Q

Quelle est la longueur des régions de complémentarité?

Pourquoi doivent-elles avoir une certaine longueur?

A

20-80 pb, Elles doivent être suffisamment longues pour que les appariements soient stables à la température qui sera utilisé à l’assemblage

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33
Q

Quelle est la limite de tailles du gène synthétisé?

A

1-2 kb au plus 4-5 kb

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34
Q

Comment fonctionne la méthode de synthèse de géne synthétique polymerase cycling assembly?

A

Assemblage des oligo à l’aide d’une polymérase thermostable

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35
Q

Quels sont les facteurs à considérer quand nous voulons optimiser la séquence du gène synthétique?

A
  • utilisation de codon
  • éviter la présence de régions répétées
  • Éviter les régions très riche en G/C ou A/T
  • Éviter que certaines régions forment des structures secondaire
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36
Q

Pourquoi faut-il éviter les régions avec un taux de G/C ou A/T trop élevé lors de la conception de gènes synthétiques?

A

Trop G/C = Haute température pour dénaturer le double brin

Trop A/C = régions très glissantes

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37
Q

Vrai ou faux

Les séquences optimisées permettent d’augmenter la production jusqu’à 10X, mais seulement pour l’ADN

A

Faux, 100X et production d’ARNm plus élevé

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38
Q

Vrai ou faux

Il est possible de synthétisé un génome jusqu’à 1Mb

A

Vrai

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39
Q

Quels ont été les premiers génomes synthétiques?

A
  • Virus de la polio
  • Phage phiX174
  • Virus de la grippe espagnole
  • ADN mitochondrial de la souris
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40
Q

Quelles sont les trois enzymes présents lors de la méthode isothermale de gibson?

A

exonucléase 5’, polymérase, ligase

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41
Q

Vrai ou faux

Plus la taille des fragments est grande, plus le chevauchement doit l’être

A

Vrai

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42
Q

Est ce que la température dans l’expérience de gibson (50C) est optimale pour toutes les enzymes?
Explique

A

+/- optimale pour ligase et polymérase (compromis)
Pas optimale pour exonucléase, mais favorable parce que si la température était optimale, l’exonucléase dégraderait tous.

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43
Q

Décrire la méthode isothermale de gibson

A

• La réaction se déroule à 50°C. L’ADN polymérase Pfusion
et l’ADN ligase Taq sont très stables à 50°C, alors que
l’exonucléase du phage T5 ne l’est pas
• Pour qu’ils puissent être assemblés, deux fragments
doivent posséder une séquence commune de 20-40 pb
• Les fragments sont d’abord digérés par l’exonucléase 5’
pour produire des extensions simple brin (sb) en 3’.
Ensuite, les extrémités sb s’apparient, l’ADN polymérase Pfusion (enzyme fidèle) comble les brèches, et les cassures sont soudées par l’ADN ligase Taq
• Plusieurs fragments peuvent être assemblés; l’ordre
d’assemblage est déterminé par la complémentarité des bases

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44
Q

Quel est un des grands avantages de travailler avec un génome synthétique?

A

Permet d’ajouter/enterrer des gène

Le génome devient accessible et modulable

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45
Q

Pourquoi peut-on utiliser la levure pour la synthèse de fragments in vivo?

A

Parce que elle est capable de recombiner de nombreux fragments d’ADN avec sa machinerie et avec une grande efficacité

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46
Q

Comment les fragments peuvent être synthétiser dans le mauvais ordre in vivo?

A

Voie de recombinaison NHEJ

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47
Q

Quels sont les opportunités et les risques des génomes synthétiques?

A

opp :

  • Créer des organismes capables de synthétiser des molécules très utiles
  • Développer des vaccins contre l’influenza

Risque :
-Créer des microbes pour les utiliser comme arme

48
Q

pourquoi est-il avantageux d’analyser l’ADNc résultant pour les gènes eucaryotes?

A

La structure des ARNm eucaryotique est beaucoup moins complexe que la structure des gènes qui les encodent ( régions non codantes, introns, etc)

49
Q

Pourquoi synthétiser de l’ADNc?

A
  • Simplifier l’analyse des génomes d’eucaryotes
  • Pour étudier l’expression des gènes
  • Pour exprimer un gène eucaryote chez un procaryote
  • Pour étudier l’épissage alternatif

Parce que l’ARNm est très instable donc il doit être converti en ADNc

50
Q

Vrai ou faux

L’épissage d’un gène produit des isoformes d’ARNm et de protéines

A

Vrai

51
Q

Quels sont les 2 ajouts majeurs à l’ARNm chez les eucaryotes après la transcription?

A
  • Extrémité 5’ est coiffée par un nucléotide particulier -> Protège contre 5’ exonucléase et assiste à l’attachement des ribosomes pour initier transcription
  • queue de poly(A)
52
Q

Combien de pourcent d’ARN total représente l’ARNm?

A

> 10%

53
Q

Quel enzyme pose un problème de contamination lors de l’isolement d’ARN?

A

ribonucléase qui dégrade ARN

54
Q

Quelles techniques sont utilisées pour éviter les contamination de RNase?

A

DEPC -> enlever par la suite par autoclavage 1h

H2O2 sur surface, puis rincage avec de l’eau traiter au DEPC ou eau faite par osmose inverse

55
Q

Comment l’ARNm poly(A) est purifier?

A

Par chromatographie sur colonne d’oligo-dT

56
Q

Comment l’ARNm est récupérer après une chromatographie sur colonne d’oligo-dT?

A

En diminuant la force ionique du tampon

57
Q

D’ou provient les transcriptases réverses utilisées pour la synthèse d’ADNc?
Est ce qu’une transcriptase est mieux qu’une autre?

A

des rétrovirus (AMV, M-MLV)
L’enzyme M-MLV est préférée car elle a une activité RNase H plus faible

Superscript : mutant de M-MLV mais pas d’activité RNase H

58
Q

Que fait l’activité RNase H?

A

Dégrade l’ARN lier à l’ADN

59
Q

Quelles sont les trois approches pour la synthèse du deuxième brin de l’ADNc?

A
  1. L’extrémité 3’ du premier brin sert d’amorce pour la synthèse
    du deuxième brin (auto-amorçage)
  2. Utilisation de la RNase H et de l’ADN polymérase I dʼE. coli
    pour la synthèse de remplacement du deuxième brin de
    l’ADNc (Méthode de Gubler et Hoffman)
  3. Addition d’une queue d’homopolymère à l’ADN simple-brin
    par la transférase terminale, une ADN polymérase
    indépendante de l’ADN (Méthode des amorces-adapteurs)
60
Q

Décrire la méthode d’auto-amorcage

A

Éliminer l’ARNm par des méthodes physiques (chauffe) ou chimique (base)
Auto-amorcage et polymérisation par Klenow
Hydrolyse du loop par nucléase S1

61
Q

Quel est un désavantage de la méthode de Gubler et hoffman

A

«Scar» à l’extrémité 5’ de l’ADN

62
Q

Décrire la méthode de Gubler et Hoffman

A

ARNm partiellement éliminer par RNase H
Construire brin par klenow (5’->3’ polymérase et 5’->3’ exonucléase)
T4 DNA ligase pour réparer les brèches

63
Q

Quelle est la seule méthode qui permet de produire des ADNc de pleine longueur?
Comment facilite-t-elle le clonage?

A

méthode amorce-adapteurs

Génère des extrémités collantes

64
Q

Vrai ou faux

Les ADNc sont utiles pour étudier l’expression de gènes à l’aide de puces d’ADN

A

Vrai

65
Q

PCR :
-Méthode simple et rapide pour…

  • Inventée par…
  • Facteur clé de son succès…
A
  • amplifier des segments d’ADN à partir d’une quantité infime d’acide nucléiques
  • Kary Mullis
  • ADN polymérase Taq : résistente à la chaleur
66
Q

Comment appelle-t-on un produit PCR?

A

amplicon

67
Q

Les produits générés au cours des deux premier cycles de PCR on tous…

A

Des longueurs indéterminées

68
Q

Vrai ou faux

Les produits désirés augmentent de façon exponentielle après le 2e cycle

A

Faux, 3e

69
Q

Donne l’équation pour les différentes données de PCR (nombre de cycle = n)

  • Molécules cible db
  • Molécule db plus grande
  • Nombre de brins d’ADN répliquer
A

Cible = 2^n-2n
plus grande = 2n
Total = 2^n

70
Q

Donne les composantes typiques d’une réaction PCR

A
  • ADN (0.01-0.1 µg) Une seule molécule est rarement utilisée
  • Amorce 1 (0,5 µM) Les séquences des amorces sont critiques
  • Amorce 2 (0,5 µM)
  • Tris-HCl (10 mM, pH 8,3)
  • MgCl2 (2,5 mM) La concentration optimale peut être différente
  • KCl (50 mM) Nécessité de sels pour lʼhybridation des amorces
  • dATP, dCTP, dGTP, dTTP (200 µM de chacun)
  • ADN polymérase thermostable (Taq, 2 unités)
71
Q

Comment peut-on déterminer la concentration optimale de Mg2+?
Pourquoi veut-on une concentration optimale de Mg2+?

A

Doit être déterminée empiriquement pour chaque paire d’amorce PCR si on désire produire le maximum d’amplicon

Concentration Mg2+ influence le rendement du produit désiré et la spécificité de la réaction

72
Q

Comment la température d’appariemment est déterminée?

A

Tm-5 degré C

73
Q

Vrai ou faux

Certaines polymérases utilisées en PCR on une activité exonucléase 5’->3’ et une activité 3’->5’

A

Faux, une des deux

74
Q

Vrai ou faux

La longueur des amorces est critique pour la spécificité de la PCR

A

Vrai

75
Q

Quelles sont les caractéritiques des amorces utilisées pour la PCR?

A

• Longueur variant entre 15-35 nt (15-20 mères pour bactéries et
20-35 mères pour eucaryotes)
• Contenu G+C autour de 50%
• Une même base répétée plusieurs fois consécutivement doit
être évitée
• Chaque amorce ne doit pas contenir de séquences
complémentaires
• Il ne doit pas y avoir de complémentarité de base entre deux
amorces (les dimères d’amorces sont problématiques)
• Les températures de fusion (Tm) des deux amorces doivent
être à peu près égales

76
Q

Sur quoi la température d’appariement à un effet en PCR?

A

effet très important sur le degré d’association entre les amorces et l’ADN cible (spécificité)

77
Q

Quels sont les facteurs qui affectent la Tm et la stabilité des hybrides ADN/ADN lors de l’appariement des amorces?

A
  1. Force ionique. Si on augmente la force ionique, on favorise la
    stabilité des hybrides
  2. Composition en bases de l’amorce. La stabilité des hybrides
    augmente avec le contenu en G + C
  3. Longueur de la plus courte chaîne dans l’ADN double brin.
    Plus elle est longue, meilleure est la stabilité. Les bases non
    appariées peuvent avoir un effet déstabilisateur important; une
    base non appariée à l’extrémité 3’ de l’amorce empêchera
    toute polymérisation de nucléotides
  4. Agents déstabilisants tels que la formamide, le glycérol et le
    DMSO. Lʼaddition dʼagents déstabilisants réduit la température
    de fusion
78
Q

Comment peut-on calculer la valeur approximative de Tm d’une amorce?

A

Tm = 4x(G+C) + 2x(A+T)

79
Q

Vrai ou faux

Les dimères d’amorces sont favorable dans une PCR

A

Faux, Produit PCR désiré grandement réduit

80
Q

Comment est-il possible de minimiser la formation de dimères d’amorces ainsi que l’amplification de produits non désirés?
Quelle option est la meilleure?

A

• Ajouter l’enzyme Taq après la dénaturation de l’ADN
• Créer une barrière physique entre l’enzyme et les amorces et
les autres composants de la réaction en utilisant une bille de
cire
• Utiliser une enzyme modifiée (couplée avec anticorps ou autre
inhibiteur) qui est activée par la chaleur (permet d’assembler la
réaction à la temp. ambiante -> meilleure option

81
Q

Quelle est la taille maximale d’un PCR normal?
La taille idéal?
La taille maximal d’un PCR long?
Qu’est ce qui permet de faire un PCR long?

A

4kb
1kb
40kb
Modification du milieu réactionnel

82
Q

Quels sont les paramètres pour générer de longs PCR?

A
  • Matrice de haut PM et de qualité (pas de fragmentation)
  • Appariement des amorces de 21-34nt à une température de 65-75
  • Ajout de composantes au tampon pour faciliter la dénaturation de la matrice
  • Utilisation d’un mélange de deux ADN polymérases thermostables : 1 fidèle et une erreur élevé
83
Q

Pourquoi est-il important dans un PCR long :

  1. Qu’il n’y est pas de fragmentation
  2. Présence de composantes pour faciliter la dénaturation
  3. Avoir 2 ADN pol
A
  1. Gène cible pourrait être couper lors de la fragmentation
  2. Haute T = problème comme dépurination -> minimise la Tm = meilleur rendement
  3. pol non fidèle = plus rapide mais fait des erreurs que pol fidèle peut corriger (pol fidèle plus lente)
84
Q

Comment peut-on éviter les contaminants d’ADN dans une rt-PCR?

A

Une amorce chevauchant la jonction entre 2 exons -> présence d’introns dans l’ADN donc évite de l’amplifier

85
Q

À quoi sert la RT-PCR?

A

• Étudier lʼexpression de gènes spécifiques
– Niveaux dʼARNm et ARN non codant (divers tissus, conditions
de culture, tumeurs avant et après traitement) et épissage
alternatif
– Lʼanalyse des produits PCR en temps réel (qRT-PCR) permet
de mesurer la quantité absolue ou relative dʼun ARNm ou dans
le cas dʼun gène dont le niveau dʼexpression est variable, de
mesurer la variation (différence entre contrôle et état cancéreux)
• La grande sensibilité de cette technique permet l’analyse des
ARNm peu abondants et les gènes exprimés dans une seule
cellule
– Possibilité d’étudier les gènes exprimés dans des cellules
difficiles à cultiver, dans des tumeurs cancéreuses, dans des
bactéries provenant de lésions

86
Q

Quelle technique de PCR permet d’amplifier les extrémités 3’ d’ARNm spécifique?

A

RACE 3’

87
Q

Quelles sont les amorces utilisées pour la méthode RACE 3’?

A
  1. Amorce spécifique au gène d’intérêt

2. Amorce universelle se liant à l’extrémité de l’ARNm ou ADNc -> séquence unique appeler «ancre»

88
Q

Pourquoi la technique RACE 5’ peut être meilleure que la technique RACE 3’?

A

Parce que l’ARNm se dégrade plus vite du coté 3’ que du côté 5’

89
Q

Que permet d’analyser la technique RACE 5’?

Quelles sont les amorces nécessaires?

A

Analyser l’extrémité 5’ d’un ARNm qui n’est pas pleine longueur

TR avec amorce aléatoires puis une queue d’homopolymère de C est ajoutée à l’extrémité 3’ du premier brin de l’ADNc

90
Q

Que permet d’analyser la PCR multiplex?

Quels sont ces spécificités?

A

permet d’analyser plus d’un locus dans une même réaction
Utilise plusieurs paires d’amorces spécifiques pour des séquences différentes
Paires d’amorces concues de facon à créer des amplicons de tailles différentes

91
Q

Comment fait-on l’analyse de produits de la PCR standard?

A
  1. Électrophorèse sur gel d’agarose
  2. Séquencage
  3. Clonage
92
Q

Vrai ou faux

Le taux d’erreurs de la polymérase Taq devient problématique lorsque les amplicons PCR sont clonés

A

Vrai

93
Q

Vrai ou faux

Les fragments PCR synthétisés pas Taq possèdent souvent une guanine supplémentaire à leurs extrémités 3’

A

Faux, adénosine

94
Q

Comment des sites de restriction peuvent être ajoutés aux extrémités d’un produit PCR?

A

en utilisant des amorces contenant ces sites en extension 5’

95
Q

Vrai ou faux Lors de l’ajout d’une amorce contenant un site de restriction, la séquence de reconnaissance doit être précédée de quelques nucléotides

A

Vrai

96
Q

Quel est l’avantage d’additionner des sites de restriction différents aux 2 extrémités d’un produit PCR?

A

Clonage du produit dans une seule direction (clonage directionnel)

97
Q

Vrai ou faux

Seulement certaines séquences peuvent être greffées aux extrémités d’un produit PCR au cours de sa synthèse

A

Faux, n’importe quelle

98
Q

Qu’est ce que la qPCR ou PCR en temps réel?

A

Méthode précise pour amplifier et quantifier
simultanément une séquence cible. Aussi appelée PCR
quantitatif (qPCR)

99
Q

Vrai ou faux
qPCR

a) le produit doit être entre 1000 et 2000 pb pour amplification à 100%
b) le produit est détecté par fluorescence à la fin de la PCR
c) Plus le produit est long, plus l’amplifiaction est efficace
d) le thermocycleur effectue les changements de température et détecte la fluorescence
e) Le qPCR peut être utiliser avec le RT-PCR

A

a) faux, 120-200
b) faux, au fur et à mesure
c) Faux, doit être court pour maximiser l’efficacité
d) Vrai
e) vrai

100
Q

Quelles sont les applications du qPCR?

A
  • Pour déterminer le niveau d’expression d’un gène particulier ou sa quantité relative par rapport à un gène de référence
  • Pour mesurer la différence d’expression d’un gène entre deux échantillons
  • Pour mesurer la quantité d’ADN dans un extrait
  • Utile même si quantification pas nécessaire pcq détecté rapidement ou analyse d’un grand nombre d’échantillon ( diagnostic médical)
101
Q

Quelles sont les deux méthodes pour détecter le produit PCR?

Quelles sont leurs particularités?

A

SYBR Green
-Pas spécifique
– Colorant qui émet de la fluorescence lorsqu’ il se lie à lʼADN
double brin
– La quantité totale dʼADN double brin est mesurée
– Méthode la plus simple et la moins coûteuse. La seule différence
avec le PCR standard, c’est qu’on ajoute un composant
supplémentaire, le SYBR Green, au mélange réactionnel
• Sonde « reporter »
– Court oligonucléotide qui fluoresce après s’être hybridé
spécifiquement à la séquence cible
– Chaque sonde a 2 étiquettes: quencher (Q) et molécule
fluorescente (R)
– Taqman: le type de sonde le plus souvent utilisé (voir Fig.
suivante)

102
Q

Quels sont les avantages de la technologie taqman par rapport à SYBR green?

A

Plus précise et le PCR multiplex est possible

103
Q

Vrai ou faux

Des milliers d’essais PCR en temps réel sont disponible sur le marché

A

Vrai

104
Q

Que permet le PCR digital?

Quels sont ces avantages?

A

Permet de contourner les problèmes inhérents aux méthodes qPCR conventionnelles

  • Pas besoin de se fier au references ou standard
  • Améliorer la précision en utilisant plus de Réplicats PCR
  • Forte tolérance aux inhibiteurs
  • Capable d’analyser des mélanges complexes
  • Détection linéaire des «small-fold changes»
105
Q

Pourquoi est utile la PCR dans l’identification d’individus?

A
  • Identifier criminels, lien de parenter, sexe
  • Source d’ADN : sang cheveux empreintes
  • Test basés sur l’analyse de polymorphismes
106
Q

Sur quoi est basée la technique d’empreinte ADN classique?

A

Sur la présence de sites hypervariables de séquences répétées dans les génomes

107
Q

Vrai ou faux
Technique d’empreinte d’ADN

a) inventée par sir Alec Jeffreys dans les années 80
b) Le courte répétitions sont localisées aux mêmes positions dans les génomes de différents individus
c) Ces courtes régions sont des microsatellites
d) Les variations entre individus sont détectée par analyse Southern

A

a) vrai
b) faux, différentes positions
c) Faux
d) vrai

108
Q

Quelles sont les limitations de la technique d’empreinte d’ADN classique?

A

• Une quantité relativement grande dʼADN est nécessaire parce
que la technique requiert une analyse dʼhybridation. Les
empreintes ne peuvent pas être produites à partir de la faible
quantité d’ADN présent dans les cheveux et les taches de sang
• Lʼinterprétation des empreintes peut être difficile à cause des
variations dans l’intensité des signaux d’hybridation. Lors de
procès, des différences mineures dans l’intensité d’une bande
entre une empreinte d’essai et celle du suspect peuvent
conduire à l’acquittement
• Même si les sites d’insertion des séquences répétées sont
hypervariables, il y a une limite à cette variabilité et donc deux
individus d’une même population courent la chance d’avoir la
même empreinte. Cette considération statistique peut aussi
mener à l’acquittement

109
Q

Qu’est ce que le profil d’ADN?

A

analyse PCR de courtes répétitions en tandem (STR)

110
Q

Quel est le microsatellite le plus commun dans le génome humain?

A

[CA]n

111
Q

Jusqu’à ___ allèles par STR dans toute la population

A

10

112
Q

Comment sont analysées chaque STR?

A

en utilisant des amorces fluorescentes s’attachants de chaque côté de la région répétée

113
Q

Vrai ou faux

Les STR peuvent être analysés plusieurs à la fois à l’aide de PCR multiplex

A

Vrai

114
Q

La méthodologie pour effectuer des profils d’ADN (CODIS) est basée sur ___ maequeurs

A

13

115
Q

Vrai ou faux

Des individus apparentés possèdent des profils d’ADN similaires

A

Vrai

116
Q

Comment fait-on le PCR pour l’identification du sexe?

A

Par l’analyse du gène codant pour l’amélogénine

X et Y se distinguent par indels dans ce gène

ADN recombinant (8 decks)

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