celledyrking

Question 1

hva er det vi trenger for å dyrke celler?

Answer 1

• Et medium/væske for å oppbevare og dyrke cellene i
• En steril-kabinett for å håndtere cellene i
• Sterile flasker eller skåler for å ha cellene i
• Et skap/rom med kontroll på temperatur, CO2-nivå og fuktighet
• Tank med flytende nitrogen for lagring av levende celler
• Sterile pipetter osv

Question 2

hvilket standardmedier bruker man for å dyrke celler?

Answer 2

• Salter
• Aminosyrer
• Glukose
• Vitaminer og mineraler
• Buffer
• pH-indikator

Question 3

gi eksempler på noen viktige Vekst- og overlevelses-faktorer for å vokse celler?

Answer 3

• Vanligvis 5-20% (10%) serum som blandes i mediet. serum kan komme fra:
– Kalveserum
– Serum fra kalve-foster
– Hesteserum
– Etc……

• Serumfritt medium (blanding av ulike vekstfaktorer;
insulin, EGF, insulin-lik vekstfaktor, interleukiner…….)

• Serum-er ingen definert sammensetning

Question 4

hva er forskjellen på Kultur med primær-celler og cellelinjer?

Answer 4

• Kultur med primær-celler
– Celler med begrenset mulighet for celledeling
• Cellelinjer
– Celler med “ubegrenset” celledeling

Question 5

hvorfor har Kultur med primær-celler Begrenset evne til å dele seg?

Answer 5

– Teleomerene forkortes for hver celledeling
– Cdk-inhibitoren p21 øker med antall
celledelinger

Question 6

Hvordan isolere ut riktige primæreceller fra et vev?

Answer 6

• Anrike på fysiske egenskaper (størrelse)
• Selektive vekstbetingelser
• Celle-sorter
– Granulering eller størrelse uten farging
- Farging mot overflate-markører

Question 7

hva er forskjellen på adherente og suspensjonsceller?

Answer 7

Adherente celler vokser/fester seg på overflate til mediet, de danner bindinger med hverandre og etter en viss tid slutter de å vokse/dele seg

i motsetning til adherente celler trenger ikke suspensjonsceller et solid medium å vokse i og de er cellelinjer (vokser uendelig)

Question 8

hvordan dyrker man suspensjonsceller?

Answer 8

• Må fortynnes (splittes) før de bruker opp all
næring i mediet
• Overfører en liten del av kulturen til ny flaske
med nytt medium
• Splitting fra hver andre dag til en gang pr uke

Question 9

hva vil det si at et medium med suspensjonsceller holder på å bli gult?

Answer 9

det vil si at cellene holder på å dø

Question 10

hvordan dyrker man adherente celler?

Answer 10

• Må fortynnes (splittes) før de blir for tette (men viktig å ikke fortynne for mye da de er avhenge av å kommunisere med hverandre)
– De fleste vokser bare i enkeltlag
– Cellene dør av anoikis (apoptose indusert av at de ikke er festet
til underlag)
• Vasker cellene med fysiologisk saltvann (PBS)
• Cellene løsnes enzymatisk fra underlaget (trypsin)
• Trypsinering stoppes ved å sette til serum (inneholder
trypsin-inhibitorer)
• En liten del av cellesuspensjonen overføres til ny flaske
med medium

Question 11

hvilke vekstbetingelser har stamceller?

Answer 11

• Stamcellene har egne vekstbetingelser
– Krever lavt O2
-nivå!!!
– Egne vekstfaktorer som stimulerer deling og 
hindrer differensiering

Question 12

hvilke type kontaminering kan man ha når man dyrker celler?

Answer 12

• Infeksjoner i kulturen
– Bakterier
– Virus
– Sopp
– Mycoplasma
• Andre celler 
– Primærceller er i utgangspunktet hetrogene
– Cellelinjer kan bli forurenset

Question 13

hvordan unngår man kontaminering når man dyrker celler?

Answer 13

• Sterilteknikk
• Holde orden
• Merke tydelig
• Antibiotika
• Anti-sopp midler
• Anti-mycoplasma midler

Question 14

hva brukes stamceller til?

Answer 14

fornye eller reparere skadet vev

stamceller gir opphav til mange forskjellige celler ved differensiering

Question 15

hvorfor dyrker man stamceller?

Answer 15

• Induserte pluripotente stamceller kan være kilde til nyttige
humane ES-liknende celler

• Pluripotente celler fra menneske og mus kan danne organoider
når de dyrkes i kultur