Antibioticos Flashcards
m.o. productor de penicilina
Penicillium Chrysogenum.
No es la cepa que se usaba originalmente la que se usa hoy en día, sino una modificada genéticamente para mayor rendimiento.
Mecanismo de acción penicilina
La penicilina actúa sobre las bacterias uniendose a la enzima transpeptidasa que es la que une las moléculas y forma los enlaces químicos entre ellas durante la formación de la pared celular. Al unirse a la enzima no permite que se forme la pared celular y la célula se lisa (se destruye).
Por eso resulta mas efectiva durante la etapa de crecimiento.
Bacteriolítico.
Pasos producción de penicilina
1) Preservación del inóculo: Para mantener las cepas del mo productor durante el mayor tiempo posible sin division celular para evitar mutaciones se conservan esporas en arena esteril.
2) Multiplicación del inóculo: Primero se reactivan las esporas conservadas, y luego se inocula en un medio sólido granular embebido en nutrientes (la idea es obtener una abundante cantidad de esporas). Se incuba estáticamente a 29°C por 7 días (se agita una vez x día para desarrollo parejo)
En el TP se uso como medio macerado de maiz y maíz partido con agua.
3) Pre-cultivo: El objetivo de esta etapa es obtener mucho inoculo para la fermentación. Se usa como fuente de C glucosa y lactosa. La incubación es con agitación.
4) Fermentación de producción: Incubación x 7 días con agitación (el mo productor es aerobio asique debe haber aireación). En esta etapa se agregan los precursores si es que quiere sintetizar algun tipo de penicilina en particular.
5) Recuperación y purificación: Se separa el antibiótico del micelio por centrifugación o filtración y luego se separa del medio de cultivo por extracción con solventes
Por qué se usa glucosa y lactosa en el medio durante la producción de penicilina?
La glucosa asegura un rápido arranque de la fermentación y la lactosa asegura que haya fuente de C mas “dificil” de metabolizar.
Necesitamos que el hongo sense que no hay tanta fuente de C y una forma de hacerlo es ponerle lactosa que es una fuente de C pero mas dificil de metabolizar.
Si no se usa lactosa, la otra forma de inducir la produccion de penicilina es usando glucosa en un fed batch, para que la concentración sea baja pero no se acabe.
Etapas de fermentación durante la producción de penicilina
1) Fase de crecimiento: Rápido crecimiento del hongo. Concentración de N alta, pH alto. Comienza a producirse la penicilina
2) Fase de maduración: Crecimiento lento del micelio. Baja la concentración de N y el pH. Máxima producción de penicilina.
3) Fase de declinación: muerte celular. La penicilina debe cosecharse antes de esta etapa.
por que?
La penicilina se destruye a pH mayores a 7,5, y como resultado de la muerte celular se liberan compuestos nitrogenados al medio que pueden aumentar el pH y arruinar la penicilina.
Controles durante la fermentación de penicilina
- Temperatura: 25 a 28°C
- Control de pH (se regula por el agregado de CaCO3 o buffers)
- Control de esterilidad: Si hay una contaminación bacteriana puede haber una rápida destrucción de la penicilina.
- Aireación: El penicillium chrysogenum es un hongo aerobio
- Control de espuma: Puede provocar que el cultivo no tenga buena aireación.
Que es y como funicona el DOSAJE BIOLOGICO?
Es una técnica para medir la concentración de antibiótico.
La idea es sembrar en una caja petri un m.o. que sea sensible al antibiótico (con un medio de cultivo apropiado) y agregar discos de papel embebidos en el antibiótico: 2 con una concentración conocida del mismo y el tercero con la solución cuya concentración queremos saber.
Se deja incubar y despues de unos días se miden los diámetros de los halos de inhibición. Como la concentración es proporcional al diametro del halo se arma una curva y con las concentraciones conocidas y se interpola la concentración desconocida.
