Analisis genomicos proteicos: Parte 1 (Recoleccion de muestras y Microarrays) Flashcards
Cual es el Nombre del lugar donde se da La recolección, el procesamiento y el almacenamiento de muestras biológicas?
Centros de recursos biologicos o muestras biologicas
Que cosas (9) son importantes conocer antes de hacer una recoleccion de muestras?
Objetivos Analisis de laboratorio para las muestras Tipo de muestras y cuantas muestras Volumen de cada muestra Validacion de todos los procesos Almacenamiento de las muestras Logistica de la toma de muestras Etica del proyecto Fondos y recursos necesarios
Cuales son los pasos que se llevan a cabo en un Centro de recursos biologicos?
Recoleccion:
- Consentimiento, protocolo, recoleccion y anotacion
Almacenamiento:
- Etiquetado y almacenamitento de datos y muestras
Procesamiento:
- Identificacion y Shiping
Cuales son las muestras mas utilizadas en investigaciones?
Sangre y fracciones de sangre Tejido Saliva/celulas bucales Tejdio placentario Medula osea Leche materna Lineas celulares Cabello Uñas Semen
Quienes son los especialistas en la recoleccion de sangre? y que instrumento se usa para recolectar la sangre?
Flebotomistas
Sistema Becton-Dickenson Vacutainer para su recoleccion
Porque es importante la sincronizacion?
Para minimizar el tiempo entre recoleccion, estabilizacion y el procesamiento de la muestra
Como en especimenes provenientes de autopsia
Cuales son las caracteristicas de la recoleccion de saliva o celulas salivales?
Celulas Bucales exfoliadas son Excelente fuente de DNA para estudios
La auto-recoleccion es seguro y barato
Enjuague bucal produce mucho DNA y de buena calidad
Como se procesa la Sangre (separacion de fragmentos)?
Crioconservacion
- Preservar linfocitos
- Usa DMSO (dimetilsulfóxido) como crioprotector
- Creacion de lineas celulares por la transformacion de Virus de Epstein Barr
Como se porcesan las muestras del enjuague bucal (saliva)?
Centrifugacion de suspension celular
Resuspension con tampon
Congelacion para su uso posterior
PCR para identificar DNA humano y bacterial
Como se hace la extraccion de DNA para, sangre, celulas bucales, tejidos frescos y bloques de tejido?
Extracción con fenolcloroformo
Se pueden usar otros metodos mejores y mas baratos
Que técnicas se usan para medir la calidad y cantidad de DNA?
Absorbancia 260nm y 280nm
Fluorescencia
PCR tiempo real (25 picogramos de DNA)
Electroforesis en Gel
Para que se usa la relacion A260 / A280?
Medida aproximada de la pureza del DNA y contaminacion de proteinas
(VERDADERO O FALSO)
EL RNA es mucho mas estable y facil de extraer que el DNA?
FALSO
El RNA es mas dificl de extraer y menos estable que el DNA
Que significa Microarrays? y para que sirven?
Micro arreglos o Micro matrices
Permiten el deposito de miles de genes o partes de genes en un portaobjetos
Funcionan como detectores moleculares
El uso de Microarrays nos permite…..
Tener una vision instantanea de actividad de genomas completos o grupo selectos de genes
Que tecnicas se emplean en los estudios de microarrays?
Hibridizacion de acidos nucleicos y deteccion por fluorescencia
Solo los puntos donde se dio la hibridizacion habra fluorescencia
Tambien se usan Northern Blot y RT-PCR
Que es un Target y que es un Probe?
Target (blanco): Molecula libre
Probe (Sonda): Molecula inmovilizada
Cuales son los 4 tipos de Microarrays?
Microarray de cDNA
Microarray de Oligonucleotidos
Microarray de Proteinas
Microarray de tejido (TMA)
Cuales son las caracteristicas del Microarray de cDNA? y cual es su proceso?
Se usa cDNA (complemento para DNA)
- Purificacion y verificacion de Amplicones
- Se depositan por capilaridad en portaobjetos por robots
Cuales son las caracteristicas de los Microarray de oligonucleotidos?
Las sondas dan porciones de DNA sintetico simple y corto
Son presinteizados y depositados en Ink-Jet o DNA chips
Cuales son las caracteristicas de Microarray de proteinas? (sondas y blancos)
Sondas son anticuerpos fijados en portaobjetos
Blancos son muestras de suero o tejido
Dificil de inmovilizar y crear proteinas 3D
Cuales son las caracteristicas de Microarray de tejido?
Uso de muestras microscopicas para hacer pruebas de DNA, RNA, proteinas
Resuelve el problema del tamaño de la muestra
