7 Extracción de DNA Flashcards
Extracción de DNA
Procedimiento para obtener DNA para posteriores análisis moleculares
Pasos fundamentales en una extracción de DNA (5* cosas)
1-Lisis celular
2-Separación del DNA del resto de componentes celulares
3-Remoción de prots (OPCIONAL)
4-Remoción RNA (OPCIONAL)
5-Precipitación del DNA
¿Para qué se hace la lisis celular?
Para liberar al DNA con procedimientos que degradan las paredes y membranas celulares
¿Cómo se logra la lisis celular? 2 tipos de procedimientos con sus respectiv ejemplos
Con procedimientos químicos: detergentes, enzimas
Con procedimiento físicos: trituración, sonicación
*Sonicación
Rotura de la membrana cell con ultrasonidos
¿Cómo se separa el el DNA del resto de componentes celulares?
Mediante solventes orgánicos en la mezcla y centrifugación; se aprovecha la naturaleza hidrofílica del DNA e hidrofóbica de algunos componentes celulares
¿Cómo se hace la remoción de prots?
Se añade una proteasa
¿Cómo se hace la remoción de RNA?
Se añade una RNAasa
¿Con qué se hace la precipitación del DNA?
Se añade alcohol, generalmente etanol frío o isopropanol
¿Por qué se hace la precipitación con alcohol?
Porque el DNA es insoluble en alcohol; por lo que se congrega formando un pellet en el fondo del alcohol
¿Para qué sirve la precipitación del DNA? (2 cosas)
Congrega el DNA y también se elimina sales solubles en alcohol
La extracción de ADN de plantas en el laboratorio se realiza utilizando
CTAB
CTAB
Detergente catiónico que se utiliza como parte del buffer de extracción
