7 Clase extracción DNA Flashcards
Extracción de DNA
Procedimiento rutinario para obtener ADN para posteriores análisis
¿Qué se hace en la extracción de DNA?
Se busca la lisis de las células para liberar sus componentes, así se puede separar los ácidos nucleicos de los demás componentes celulares y purificarlos
Lisis mecánica
Ruptura física de pared y membranas celulares.
CTAB
¿Qué significan las letras?
bromuro de cetiltrimetilamonio
¿Qué hace el N en la lisis mecánica?
Inhibe actividad de nucleasas
CTAB
¿Qué es?
detergente no iónico
3 cosas que hace el CTAB
1) Solubiliza pared celular y membranas lipídicas
2) Precipita ADN
3) Desnaturalización proteínas
ADN
¿Naturaleza hidrofílica o hidrofóbica?
Hidrofílica
Prots, lipids, comp orgánicos
¿Naturaleza hidrofílica o hidrofóbica?
Hidrofóbica
¿Con qué se hace la resuspensión del DNA?
La resuspensión se hace en agua tratada con DEPC o en solución salina como TE
¿Para qué sirve la resuspensión?
Las interacciones iónicas del DNA con los componentes de la solución dan estabilidad a los ác nucleicos e inhiben la actividad de proteasas
¿Cuándo se considera que el ADN tiene pureza óptima en la relación A260/280? ¿Cuándo es “aceptable”?
Se considera ADN con pureza óptima una relación A260/280 entre:
1.8-2.0
Un ADN de pureza aceptable debe tener al menos una relación:
A260/280 > 1.6
¿Cuándo se considera que el ADN tiene pureza óptima en la relación A260/230?
Se considera ADN puro cuando la tasa (ratio) A260/230 se sitúa entre:
1.8-2.2
¿Qué indica un valor A260/280 < 1.6 ?
Puede indicar una posible contaminación por compuestos aromáticos como fenoles y
proteínas
¿Qué indica un una relación A260/280 > 2.1?
Puede indicar la presencia de ARN en la muestra
