3. Méthodes Flashcards
Que signifie la constance de dissociation?
C’est un nombre qui indique à quel point une molécule, comme un acide ou une base, se dissocie ou se sépare en ions lorsqu’elle est dissoute dans l’eau.
Qu’est-ce que les techniques in vitro?
Techniques variées avec les cellules primaires ou immortalisées
3 types de techniques in vitro (immunocytochimie, PCR/Western et affinité drogue-récepteur)
Quels sont des exemples de techniques in vitro?
- Utilise une drogue associée à un radioisotope pour mesurer la constante de dissociation (kD), saturabilité du récepteur, nombre maximum de récepteurs (Max) occupés selon la concentration de ligand
- Comparer l’affinité contre un autre ligand (expériences en compétition)
Quel est l’acronyme de la constance de dissociation?
kD
Quel est l’acronyme du nombre maximum de récepteurs?
Bmax
Quel est l’objectif de la pharmacologie comportementale?
Comprendre l’action d’une drogue sur le comportement
Quel est l’importance de la pharmacologie comportementale?
Établir des liens entre mécanismes physiologiques et réponses comportementales
Évaluer la puissance et le spectre d’activité d’une drogue
Développement de modèles pathologiques
Liste quelques plantes psychotropes dans l’histoire
Coca
Pavot
Aminata muscaria
Cannabis
3 théoriciens des bases théoriques de l’étude des drogues
John B. Watson
Ivan Pavlov
B.F Skinner
John B. Watson et l’étude des drogues
Prône l’étude plus objective du comportement plutôt que de l’expérience subjective des patients.
Utilisation de mesures et analyses du comportement de façon systématique et précise pour tenter de faire de la psychologie une science
Pavlov et l’étude des drogues
Il a découvert le pouvoir de l’association et développa ce qu’on a nommé le conditionnement classique
Skinner et l’étude des drogues
S’intéresse à la modulation de comportement préexistants par un stimulus, le renforcement.
Notion importance face au développement de dépendance aux drogues.
Révolution pharmacologique des années 50, le cas de la chlorpromazine (Thorazine)
Traitement efficace pour la psychose, démontre rentabilité de drogues psychotropes ($ motive), encourage le développement de tests comportementaux, mariage pharmaco/psycho”
Étapes de mise en marché d’une drogue au Canada
- Études in vitro
- Études animales
- Études cliniques
- Population restreintes
- Stade commerciale
Étape 0 : Recherche initiale
Avant la phase pré-clinique
Tests initiaux de diverses substances chimiques, biologiques ou naturelles
Recherche préliminaire sur toxicité, effet, efficacité, mécanismes d’action…
Étape 0 : Techniques biochimiques et in silico
Après/pendant sélection de principe actif, mais avant in vivo
Détermination de structure de principe actif (si pas déjà connue)
Analyse computationelle de cibles potentielles/activité
Étape 1 et 2 : Pré-clinique
Recherche plus rigoureuse sur cellules (in vitro) et animaux (in vivo)
Confirmation de résultats préliminaires (toxicité, efficacité, effets secondaires)
Puissance statistique accrue (groupes plus grands)
Objectif: Démontrer potentiel et que le principe actif est sauf (ou peu de risques)
Étape 3: Essais cliniques (phases)
Phase 1: Innocuité
Phase 2: Efficacité
Phase 3: Confirmation
Phase 4: Surveillance
Question: Phase 1 des essais cliniques
Innocuité: est-ce que le médicament est sauf?
Question: Phase 2 des essais cliniques
Efficacité: est-ce que le médicament fonctionne?
Question: Phase 3 des essais cliniques
Confirmation: mais vraiment, est-ce qu’il fonctionne?
Question: Phase 4 des essais cliniques
Surveillance: avons-nous manqué quelque chose?
Innocuité
S’assurer que le principe actif pose peu ou pas de risque dans un petit groupe de personnes en bonne santé
Détermine:
- Pharmacocinétique
- Gamme de dosages sans danger
- Effets indésirables
Efficacité
S’assurer que le principe actif fonctionne pour la population ciblée. Plus grand nombre d’individus présentant la pathologie à traiter
Détermine:
- efficacité du traitement
- dosage idéal
innocuité (cont.)
Confirmation
Administration sur une plus grande échelle, seulement si les résultats de la phase 2 sont prometteurs
Confirmation de:
- Efficacité du traitement
- Surveiller les effets secondaires
- Comparer à traitements courants
Surveillance
Après l’approbation du médicament et vendu sur le marché. Sert à recueillir davantage d’infos.
Détermine:
- Avantages/risques à long terme
- Formulation de drogue idéale
Techniques in vitro
Exemples
Culture de cellules
Immunocytochimie
Western/PCR
Culture de cellules
Technique in vitro
Cellules primaires ou immortalisées en culture
Toxicité (mesure de la viabilité des cellules selon la concentration d’une drogue) de la drogue pour plusieurs types de cellules
Études sur les mécanismes d’action
Rapide, coût réduit vs in vivo
Immunocytochimie
Technique in vitro
Utilisation d’anticorps pour visualiser protéines ou molécules d’intérêt
Combiné avec anticorps secondaire fluorescent pour visualiser sous le microscope
Western/PCR
Technique in vitro
Extractions de protéines de cellules
Divisées par leur taille dans leur gel poreux et transféré à une membrane
Anticorps pour protéine/ARN d’intérêt (comme ICC)
Quantification relative avec/sans drogue
Techniques in vivo
définition
une expérimentation utilisant un organisme vivant entier
Important pour recherche sur l’effet thérapeutique d’une drogue
Qu’est-ce que la pharmacologie comportementale?
Comprendre l’action d’une drogue sur le comportement
Comment est-ce que les techniques in vivo sont éthiques?
Modèle le plus représentatif pour la cible de traitement
Modèle et stratégies expérimentales qui réduisent le nombre d’animaux requis
Choix de modèles in vivo
- Maladie induite
- Changements spontanés
3.Animaux génétiquement modifiés - Modèles négatifs
- Animaux sains
Modèle in vivo : Maladie induite
Animaux sont amenés à présenter une pathologie similaire à celle qui affecte les humains en administrant des médicaments ou produits biologiques, en infligeant des blessures ou en les soumettant à un stress ou à d’autres conditions environnementales
Modèle in vivo: changements spontanés
Incluent des animaux où le cours normal de leur vie les prédispose à développer une maladie spécifique
Modèle in vivo : animaux génétiquement modifiés
Les sujets génétiquement modifiés sont des animaux porteurs de gène ou de protéines knockin ou knock-out.
Modèle in vivo: modèles négatifs
Emploient des individus qui ne sont pas sensibles à certaines maladies mais servent à évaluer la sensibilité à une pathologie spécifique
Modèle expérimental utilisé pour étudier les effets d’une condition ou d’une maladie en l’absence d’un facteur spécifique, ou pour tester l’impact de l’absence d’une réponse, comme un traitement ou une intervention.
Modèle in vivo: animaux sains
Animaux sains, n’ont pas de condition médicale
Évaluations primaires du comportement animal
Évaluation simples (physiologiques et comportementales, vérifications des interactions)
Examine l’effet de la drogue sur des comportements naturels (coordination générale, mouvement)
Évaluation primaire du comportement animal : open field
Mesure de l’activité motrice spontanée (SMA) est la plus simple
Exemples de mesure du SMA :
- Champ ouvert et locomotion mesurée électroniquement
Certains médicaments ralentissent les mouvements ou provoquent le sommeil, tandis que d’autres accélèrent les mouvements
Évaluation secondaire du comportement animal
Évaluations de comportements plus complexes, souvent équivalent à un construit humain et nécessitant un certain apprentissage
Exemples de comportements évalués lors de l’évaluation secondaire
Anxiété - labyrinthe croisé surélevé et test d’interaction sociale
Analgésie - tail flick, paw lick
Amnésie - test de réactions retardées
Apprentissage et mémoire - labyrinthe radical, aquatique de Morris
Qu’est-ce que la labyrinthe croisé surélevé?
Mesure d’anxiété
Les médicaments connus pour soulager l’anxiété font que les rats passent plus de temps qu’ils ne le feraient normalement sur les bras non protégés
Qu’est-ce que le test d’interaction sociale?
Mesure d’anxiété et permet de mesurer la sociabilité de l’animal ainsi que l’anxiété
Qu’est-ce que le tail flick/paw lick (douleur/analgésie)
Mesure de la douleur analgésie
Capacité d’un médicament à bloquer la douleur
Qu’est-ce que le tail flick/paw lick (amnésie/mémoire)?
Mesure d’amnésie / mémoire
Stimulus est montré pendant une courte période, stimulus est supprimé. Après un délai, deux stimulus de comparaison sont montrés, l’animal choisit le stimulus de comparaison qui correspond à l’échantillon
Labyrinthe radical
Mesure d’apprentissage et de mémoire
8 bras avec nourriture à chaque bout. Performance avec ou sans drogue
Labyrinthe aquatique de Morris
Mesure d’apprentissage et de mémoire
Plate-forme submergée sous de l’eau blanche, le rat doit se repérer à l’aide de repères visuels ; avec ou sans drogue
Est-ce que les techniques in vivo sont traduisibles à l’humain?
taux d’échec de traduction d’études de drogues chez l’animal est de plus de 92%
Facteur principal : toxicité inattendue, manque d’efficacité.
Comment améliorer?
- Organes sur puces
- Testing uniforme
Effets des drogues chez l’humain - effets subjectifs
Auto-évaluations
Comment te sens-tu après avoir pris X?
Pas tellement utile mais peut te servir de guide
Échelle largement utilisée dans la recherche sur les médicaments
Le profil des états d’humeur (POMS), échelle de Likert
L’inventaire du centre de recherche sur al toxicomanie (ARCI), comparaison aux drogues existantes
Effets des drogues mesurés sur la perception
** diapo 43 lire plus
Fréquence critique de fusion: sensible à de nombreux médicaments. Capacité de détecter le scintillement est une mesure fiable du bon fonctionnement du système visuel.
Effets des drogues sur la performance motrice, temps de réaction
Préoccupation majeure dans l’évaluation des effets des médicaments sur l’homme
L’une des mesures de performance les plus simples est le test de réaction simple (RT), où le participant doit réagit, appuyer sur un bouton le plus vite possible
Effets d’une drogue sur la performance motrice, coordination
La coordination est mesurée par un appareil appelé rotor de poursuite. Le participant est invité à tenir l’extrémité d’un stylet sur un endroit contenu dans un disque rotatif. Le temps total pendant lequel le participant est capable de tenir le stylet sur le point mobile est une mesure de la coordination.
L’effet d’une drogue sur l’attention et la vigilance
L’attention et la vigilance peuvent être affectés par de nombreux médicaments
L’horloge de Mackworth, détecter quand la main se déplace plus vite à la fois qu’un pas.
Effet d’une drogue sur la mémoire à court terme
Le test N-back (test de MCT)
Série de lettres ou d’images est affiché une par une sur un écran. Il doit se rappeler du stimulus qui a été montré précédemment; deux stimuli arrière; ou trois…
Effets des drogues sur la mémoire à long terme (déclarative)
Demander à un participant de se souvenir d’une liste de mots ou d’objets, et de s’en souvenir après certain temps.
Reproduire les éléments de la liste (rappel libre), ou montrer un ensemble d’éléments et lui demander d’identifier ceux qui étaient sur la liste (rappel avec repères)
Les drogues peuvent interférer avec le rappel libre des souvenirs, mais ont peu d’effet sur le rappel avec des indices.
Effet des drogues sur la désinhibitation
Les drogues peuvent interférer avec la capacité d’une personne à retenir ou à inhiber les actions (désinhibitation)
tâche du no-no et la tâche du go-stop
Tâche du no-go
Le participant doit répondre le plus rapidement possible à un stimulus, mais ne doit pas répondre à un stimulus différent
tâche de désinhibituation
Tâche du go-stop
. Il y a un signal de départ, et le participant est invité à y répondre le plus rapidement possible, mais lors de certains essais, le signal de départ est rapidement suivi d’un signal d’arrêt. Le participant est invité à ne pas réagir s’il y a un signal d’arrêt. Le temps entre le signal de départ et le signal d’arrêt peut varier. Si le retard est très court, la réponse au signal de départ est facilement inhibée, mais à mesure que l’intervalle s’allonge, il devient de plus en plus difficile d’arrêter la réponse. Pour chaque participant, le délai auquel il est capable d’inhiber la réponse 50% du temps est déterminé. Certaines drogues, comme l’alcool, allongent ce délai.
L’effet d’une drogue sur la conduite
- Observer compétences de conduite dans la circulation urbaine en fonction de facteurs (pas éthique car danger pour les autres)
- Conduite sur un circuit fermé
- Stimulateurs de conduite informatisés pour mesurer le temps de réponse
L’effet d’une drogue sur l’imagerie
La tomographie par émission de positrons (TEP)
Imagerie par résonance magnétique fonctionnelle (IRMf)
Tomographie par émission de positrons (TEP)
mesure en trois dimensions une activité métabolique d’un organe grâce aux émissions produites par les positons issus d’un produit radioactif injecté.
Imagerie par résonance magnétique fonctionnelle (IRMf)
mesure l’activité cérébrale en détectant les changements associés au flux sanguin. Repose sur le fait que le flux sanguin cérébral et l’activation neurone sont couplés. Zone de cerveau utilisée = flux sanguin augmente
