1. PCR Flashcards
Al utilizar SYBR Green, la sensibilidad y especificidad del ensayo es determinado por qué componente
Los primers
De qué especie pertenece la Taq polimerasa utilizada en la PCR:
Thermus aquaticus.
Para calcular el número de copias del ADN en PCR, se utiliza la ecuación:
2N, donde N representa al número de ciclos de la PCR.
¿Cuál es la principal ventaja de utilizar la técnica de PCR?
Puede amplificar millones de copias de ADN a partir de una pequeña cantidad demuestra, por un corto período de tiempo.
¿Cuáles son los componentes principales de TaqMan para PCR en tiempo real?
Un fluoróforo y quencher
¿Cómo actúa la TaqMan durante los ciclos de PCR en tiempo real?
Cuando la ADN polimerasa extiende el primer, se encuentra e hidroliza la sonda desde el extremo 5 ‘, liberando el fluoróforo de la sonda. La emisión del fluoróforo ya no se apaga y hay un aumento en la fluorescencia.
Algunas aplicaciones de la técnica de PCR son:
Clonación, ciencias forenses, pruebas de paternidad
Desventaja de utilizar SYBR Green:
Se puede unir a dímeros no deseados
¿Cómo se puede identificar la formación de dímeros no deseados?
A través del análisis de la curva de disociación de ADN o mediante electroforesis en gel.
Campo multidisciplinario que intersecta ingeniería, física, química, bioquímicas, nanotecnología y biotecnología
Campo de la Microfluìdica
Aplicaciones de la PCR portable:
Detección de patógenos en áreas remotas y de armas biológicas.
Microbiólogo sospechoso en los ataques de anthrax:
Bruce Ivins.
Compañía que desarrolla instrumentos confiables y sensibles para la biodetección
BioFire Diagnostics.
Nombre del primer aparato de PCR portable que entrega resultados con la calidad de un laboratorio en el campo:
RAZOR EX.
Son características del aparato de PCR portable:
Detección en menos de 30 minutos, no requiere fuente de poder externa y tiene un peso de 9 libras.
¿Cuál es el uso esperado del Palm Multiplex – RT- PCR?
Screening en agricultura, monitoreo de brotes patogénicos y detección de agentes biológicos.
Tècnicas utilizadas en el Palm Multiplex-rt-PCR:
Lisis de la muestra, Purificación, análisis con PCR e identificación de ácidos nucleicos de interés
VerePLEX (lab-on-a-chip) es una prueba que integra las siguientes aplicaciones de la biología molecular:
PCR y microarreglos.
VereFlu es un laboratorio en un chip (lab-on-chip) portables para la detecciòn de todos los tipos de influenza:
Verdadero
Instrumento que no requiere calibración, además de contar con un software que no necesita una computadora externa:
Hunters RT-PCR instrument
Termociclador capaz de controlar de forma confiable las reacciones de PCR para la detección del ADN, la secuenciación y otras aplicaciones ilimitadas
OpenPCR
Características de OpenPCR
precisión de temperatura de +/- 0,5 C, uniformidad térmica de bloque térmico de +/- 0,3 C,
Cuáles son los estadios para llevar a cabo una PCR y realizar el análisis de DNA?
Extracción de DNA; amplificación de DNA; Análisis de DNA
De qué organismos se puede recuperar material genético?
Bacterias, plantas, humanos y animales
Menciona 3 tipos de PCR:
PCR de punto final; PCR en tiempo real; PCR multiplex; PCR reversa
Menciona los componentes de la PCR:
DNA molde, dNTPs, polimerasa, primers (FW, RV), buffer
Cuál es el rango de la concentración de DNA para una PCR?
50-100ng/uL
Cuáles son los parámetros que se deben de mantener para tener una PCR exitosa?
Calidad del DNA/ cDNA, de los dNTPs, de la polimerasa y de los primeres, además de la concentración de MgCl
Cuáles son los tres etapas de una PCR?
Desnaturalización, Alineación y extensión
Cuántas moléculas de DNA/cDNA se tendrán después del 3er ciclo de PCR?
8 moléculas
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DIYbio
