Week 4 - (q)PCR

Question 1

Wat is doel een PCR.

Answer 1

Amplificeren van stukjes DNA er in forensische context uiteindelijk iets te kunnen zeggen.

Question 2

PCR proces

Answer 2

Incubatiestap - 10 94/95 met Amplitag gold, Zodat er PCR specifieke producten gemaakt worden
Cyclus - Loopt 28 - 32x

Question 3

Cyclus van PCR

Answer 3

Denaturatie (94) - Dubbelstrengs DNA wordt enkelstrengs
Annealing (50-60) - binden van primers
Extensie (72) - inbouwen nucleotides
(Final extension)
Exponentiele toename

Question 4

Wat gebeurd er bij Final extension

Answer 4

Resterende nucleotide worden ingebouwd en de final hold - 4 graden

Question 5

Wat is qPCR

Answer 5

Amplificeren DNA
Concentratie bepaling DNA door middel van kalibratielijn

Question 6

Treshold

Answer 6

Minimale fluoriscentie van sample om boven de achtergrond waarde uit te komen

Question 7

Ct

Answer 7

Aantal cycli wanneer signaal boven je treshold uitkomt.
Lage Ct > veel DNA
Hoge Ct > weinig DNA

Question 8

Fluorescerende DYE(s)

Answer 8

SYBR Green - De dye bindt aan dsDNA en neemt fluoriscentie 1000 maal toe dit kan weer gemeten.
Nadeel: overschatting van DNA concentratie. Niet specifiek

Question 9

Taqman probe

Answer 9

Reporter en Quencher
De quencer neemt de energie op van de reporter wanneer deze aan elkaar verbonden zijn. Bij vermeerdering zal de polymerase de prbe kapot knippen en zal fluorisceren.
nadeel: duur
voordeel: zeer specifiek