Vl 3 II RNAi

Question 1

Grob: Was ist RNA-interferenz?

Answer 1

-proteinassistierte RNA-RNA-Interferenz

Question 2

C. elegans wächst auf Agarplatten mit E. coli als Nahrung. wie können dadurch seine Gene einen Knockdown erfahren?

Answer 2

Wenn die Würmer E. coli fressen, die dsRNA Moleküle exprimieren, kann das zu einem spezifischen knock-down der Genexpression führen!

Question 3

Wie ensteht der RNA-i silencing complex?

Answer 3

• dsRNA mit dicer(Endonuklease) schneidet inn Definierten Abständen 21mere
• RNA silencing comnplex(RisC) nutzt diese RNA und Endonuklease schneidet homologe RNAs zu siRNA-Sequenzen

Question 4

Wie nutzt man RNAi?

Answer 4

-dsRNA wird künstlich erstellt, die homolog zu Ziel mRNA ist, die herunterreguliert ist

Question 5

Welche andere Art dsRNA zu machen?

Answer 5

• miRNAs->einzelstränig mit revers Komplementären Abschntten, die hybridisieren
• benötigt nur einen Vektor der Hairpin transkribiert

Question 6

-Vorteil von RNAi gegenüber knock out?

Answer 6

• Knockout oft tödlich
• ei Knockdown ist Organismus noch Lebensfähig und kann analysiert werden

Question 7

Warum ist RNAi in C. elegans besonders wichtig?

Answer 7

• amplifiziert dsRNA selbst
• si_komplex bindet an RNA und RdRNAPol nutzt diese als primer und amplifiziert RNA und es enteht mehr dsRNA

Question 8

RNA-Vorteile und Nachteile?

Answer 8

RNAi Vorteile:

• Spezifischer als pharmakologische Ansätze
• Einfach zu designen (Resistenzen!)
• Mehrere Gene gleichzeitig treffen

RNAi Nachteile:

• Nur KD, nicht KO
• “Delivery” schwierig
• siRNAs nur bedingt stabil
• exogene siRNAs können die endogene RNAiMachinerie überlasten
• off-targets
• Nebeneffekte wegen der Interferon-Antwort