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Genomics > Vektoren und Klonierung > Flashcards

Vektoren und Klonierung Flashcards

1
Q

Was bedeutet Klonierung?

A

Die Vervielfältigung von DNA

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2
Q

Was ist ein Klonierungsvektor?

A

Transportmittel für die Übertragung von Fremd-DNA in eine lebende Empfängerzelle

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3
Q

Welche Regionen muss ein Klonierungsvektor aufweisen?

A

Origin of Replication Selektionsmarker (oft Antibiotikaressistenz) Klonierungsstelle (Polylinker)

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4
Q

Der Replikationsursprung entscheidet über __________________, die in einem Bakterium vorliegen.

A

Der Replikationsursprung entscheidet über die Zahl der Plasmidkopien, die in einem Bakterium vorliegen

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5
Q

Die Klonierungsstelle enthält _________, die nur ________ im Vektor vorkommen.

A

Die Klonierungsstelle enthält Schnittstellen, die nur einmal im Vektor vorkommen

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6
Q

Was versteht man unter der Klonierungskapazität eines Vektors?

A

Die für den Vektor maximale Größe des Inserts

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7
Q

Was versteht man unter der Handhabbarkeit eines Vektors?

A

Stabilität des Vektors

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8
Q

Welche beiden Vektoren haben die geringste/höchste Klonierungskapazität?

A

geringste: Plasmid & 𝝀-Phage höchste: bacterial/yeast artificial chromosome (BAC/YAC)

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9
Q

Je höher die __________ eines Vektors, desto geringer ist seine __________.

A

Je höher die Klonierungskapazität eines Vektors ist, desto geringer ist seine Handhabbarkeit.

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10
Q

Was ist ein shuttle-Vektor?

A

Ein Vektor welcher in 2 verschiedenen Organismen funktional ist.

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11
Q

Wofür verwendet man shuttle-Vektoren?

A

DNA wird zunächst in Bakterien kloniert und die DNA dann in den Zielorganismus transferiert, wo das Genprodukt gebildet wird.

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12
Q

Welche Komponenten benötigt ein shuttle-Vektor neben denen eines normalen Vektors?

A

Einen weiteren Replikationsursprung und einen weiteren selektierbaren Marker

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13
Q

Welchen Organismus befällt der Phage 𝝀 ?

A

E. coli

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14
Q

Wie kann der Phage 𝝀 als Vektor verwendet werden?

A

In dem Genom des Phagen 𝝀 gibt es eine Region, welche nicht für essentielle Produkte kodiert. Diese Region kann durch Fremd-DNA ersetzt werden.

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15
Q

Was ist eine Bedingung für die Verwendung des 𝝀 Phagen als Vektor?

A

Die Gesamtgröße des Genoms des Phagen 𝝀’s darf nur um ± 10% von der natürlichen Größe abweichen.

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16
Q

Was ist ein Relacementverktor ?

A

Bei einem Replacementvektor wird zu nächst die Region mit den nicht essentiellen Genen durch ein “Stuffer-Fragment” ersetzt. Dieses kann anschließend durch ein Insert ersetzt werden.

17
Q

Wie groß sind die Inserts der Replacementvektoren?

A

10-20 kB

18
Q

Wofür wird ein Replacementvektor verwendet?

A

genomische DNA-Banken

19
Q

Was ist ein Insertionsvektor?

A

Bei einem Insertionsvektor wird das Genom des 𝝀 Phagen an einer Stelle geschnitten und ein Insert dort eingefügt.

20
Q

Wie Groß sind die Inserts bei Insertionsvektoren?

A

0-10 kB

21
Q

Wofür werden Insertionsvektoren verwendet?

A

cDNA-Banken

22
Q

Wie wird eine Genbank hergestellt?

A
  1. Gesamte Genom des Organismus durch Restriktionsenzyme in Fragmente zerlegen 2. Einbringen der Fragmente in 𝝀 Phagen 3. Einbringen der DNa-Fragmente in E. coli durch Infizierung mit 𝝀 Phagen
23
Q

Wie durchsucht man eine Genbank nach einer Sequenz?

A
  1. “Fingerabdruck” von der Orginalplatte 2. Lyse der der Bakterien und Denaturierung der DNA auf der Membran des Fingerabdruckes 3. Hybridisierung mit markierter DNA-Sonde
24
Q

Wie werden cDNA-Banken hergestellt?

A
  1. Synthese des cDNA-Stranges 2. Synthese des komplementären Doppelstranges 3. Klonierung in Phagen 4. Isolierung von Phagen
25
Q

Wie erfolgt die Synthese eines cDNA-Stranges?

A
  1. Hybridisierung der mRNA mit oligo-dT Primer 2. Transkription der mRNA in cDNA 3. Entfernung der mRNA durch alkalische Lösung 4. Anfügen eines Poly-G-Schwanzes an das 3’-Endes der cDNA
26
Q

Wie erfolgt die Synthese des zur cDNA-Komplementären Stranges?

A
  1. Hybridisierung mit Oligo-dC Primer 2. Synthese des komplementären Stranges 3. Schutz vor Eco R I durch Methylierung
27
Q

Was sind Cosmide?

A

Plasmide, die eine 𝝀 cos-site enthalten

28
Q

Während ______ öfter in einer Zelle vorkommen können, kommen ______ maximal einmal pro Zelle vor.

A

Während Plasmide öfter in einer Zelle vorkommen können, kommen BACs maximal einmal pro Zelle vor

29
Q

Was ist eine genomische Bank/Genbank?

A

Sammlung von rekombinanten Klonen, die ein vollständiges Genom repräsentieren

30
Q

Wozu verwendet man genomische Banken?

A

Zum finden und Klonieren eines Gens Zur Kartierung von Genomen und Genomabschnitten Zur Sequenzanalyse eines Genoms

31
Q

Was sind die Anforderungen an eine genomische Bank?

A

Repräsentivität Technisch einfache Handbarkeit Stabilität der klonierten DNA

32
Q

Welche Klonierungskapazität haben die einzelnen Vektoren?

A
  • Plasmid → max. 8 kb
  • lamda-Phage → max. 25 kb
  • Cosmide → max. 44 kb
  • P1-Phage → max. 100 kb
  • BAC → max. 300 kb
  • YAC → max. 1000 kb

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