Nukleasen

Question 1

Allgemein: Was bewirken Nukleasen?

Answer 1

Sie schneiden Nukleinsäuren

Question 2

Wie werden Restriktionsendonukleasen benannt?

Answer 2

Name des Organismus + Nummer des Restriktionsenzyms

Question 3

Wie viele Typen von Restriktionsenzymen sind bekannt?

Answer 3

3

Question 4

Was sind die zwei Aktivitäten von Restriktionsendonukleasen?

Answer 4

Nuklease-Aktivität

Methylase-Aktivität

Question 5

Wofür ist die Nuklease-Aktivität der Restriktionsendonucleasen?

Answer 5

Zum spalten des Zucker-Phosphat-Rückgrates der Nukleinsäuren

Question 6

Wofür ist die Methylase-Aktivität der Restriktionsendonukleasen?

Answer 6

Für die Methylierung der Erkennungssequenz

Question 7

Restriktionsendonukleasen sind ____________ . Das __________ dient dem Schutz der eigenen DNA.

Answer 7

Restriktionsendonukleasen sind methylierungsabhängig. Das Methylierungsmuster dient dem Schutz der eigenen DNA.

Question 8

Was sind die Eigenschaften von Restriktionsendonucleasen des Typs I?

Answer 8

Komplex aus mehreren Untereinheiten

Gleichzeitig Methylase- und Nuclease-Aktivität

spezifische 15 bp Bindungsstelle

Schneiden zufällig ca. 1000 bp entfernt

Abhängig von ATP, Mg2+ & S-Adenosylmethionin

Question 9

Was sind die Eigenschaften von Restrictionsendonucleasen des Typs III?

Answer 9

nicht-palindromische Erkennungssequenz

schneidet in einen definierten Abstand ca. 5 - 15 bp neben der Erkennungssequenz

bildet distinkte Fragmente

benötigt ATP & Mg2+

Question 10

Was sind die Eigenschaften von Restrictionsendonucleasen des Typs II?

Answer 10

Nuclease- und Methylierungs-Aktivität liegen auf getrennten Enzymen

extrem spezifische palindromische Erkennungssequenz (meist 4-8 bp)

Bindungs- und Schnittstellen sind identisch

jedes mit spezifischen Puffer-Anforderungen

Question 11

Welche zwei Arten von Enden gibt es nach dem Verdau mit Restriktionsenzymen?

Answer 11

Sticky- & Blunt-ends

Question 12

Was ist der Vor-/Nachteil an Sticky-ends?

Answer 12

Die Nukleinsäure-Moleküle lassen sich leicht wieder zusammenbauen, jedoch sind nur weniger Kombinationen möglich

Question 13

Was ist der Vor-/Nachteil an Blunt-ends?

Answer 13

Es gibt viele Kombinationsmöglichkeiten, jedoch sind die Moleküle schwieriger wieder zusammen zu fügen

Question 14

Wie lässt sich bei Stick-ends die Anzahl der Kombinationsmöglichkeiten erhöhen?

Answer 14

Restriktionsenzyme, die unterschiedliche Erkennungssequenzen haben, können zueinander passende Enden produzieren, sodass viele Kombinationen möglich sind.

Question 15

Was sind Isoschizomere?

Answer 15

Restriktionsenzyme mit gleicher Erkennungssequenz, die an der gleichen Stelle schneiden.

Question 16

Was sind Neoschizomere?

Answer 16

Restriktionsenzyme mit gleicher Erkennungssequenz, die an einer anderen Stelle schneiden.

Question 17

Was sind Methylierungspaare?

Answer 17

Enzyme mit gleicher Erkennungssequenz aber unterschiedlicher Methylierungsabhänigkeit

Question 18

Wie ist die Einheit zur Aktivität von Restriktionsenzymen definiert?

Answer 18

Eine Einheit eines Restriktionsenzyms ist die Menge an Enzym, die 1 mikrogramm DNA des Phagen 𝝀 in einer Stunde in speziellem Puffer bei 37°C vollständig verdaut.

Question 19

Was sind die Probleme mit der Definition zur Aktivität von Restriktionsenzymen?

Answer 19

Zahl der Schnittstellen unterschiedlich

𝝀-DNA ist linear

Manche Enzyme haben nicht bei 37°C ihren Optimumsbereich

Question 20

Wie wird ein Restriktionsverdau pipittiert?

Answer 20

1. x mikroliter H20
2. 2 mikroliter 10-fach Puffer
3. x mikroliter DNA
4. ( x mikroliter BSA)
5. 0,x mikroliter Enzym

→ insgesamt 20 mikroliter

Question 21

Wie spalten Nucleasen Nukleinsäuren?

Answer 21

Sie spalten die Phosphordiester-Bindung innerhalb von Nukleinsäuren

Question 22

Was für 2 Arten von Nukleasen gibt es?

Answer 22

Exo- und Endonukleasen

Question 23

Was ist der Unterschied zwischen Exo- und Endonukleasen?

Answer 23

Exonukleasen: Spalten vom Ende einzelne Nukleotide ab

Endonukleasen: spalten beliebig innerhalb von Nukleinsäuren