Modifizierende Enzyme Flashcards
Was für wichtige Arten von modifizierenden Enzymen gibt es?
Ligasen, Phosphatasen, Kinasen, Transferasen
Was ist die Eigenschaft einer Ligase?
Sie verknüpft das 5’-Phosphatende mit der 3’-OH-Gruppe zweier DNA-Stränge
Was für Anwendungen gibt es für Ligasen?
Ligation von DNA-Enden (z.B PCR-Produkte in Vektor)
Verknüpfung von Bruchstellen in DNA
Welche Bedingungen benötigen Ligasen?
Mg2+ & ATP
Wie lange dauert die Ligation von Sticky-ends und bei welcher Temperatur findet sie statt?
10 min - 1h bei Raumtemperatur
Wie lange dauert die Ligation von Blunt-ends und bei welcher Temperatur findet sie statt?
Übernacht bei 15°C
Warum ist die Temperatur bei der Ligation von blunt-ends niedriger als bei der von sticky-ends?
Durch die niedrigeren Temperaturen wird die molekular Bewegung reduziert, wodurch die Fragmente besser zusammengesetzt werden können.
Was ist die Eigenschaft von Phosphatasen?
Hydrolysiert die 5’-Phosphatgruppe von DNA, RNA, etc.
Wofür werden Phosphatasen angewendet?
Dephosphorylierung von Vektorenenden, um zu Verhindern, dass sich ein Vektor ohne den Einbau eines Inserts wieder schließt (reduzierung der Religationsrate).
Was für Bedingungen benötigen Phosphatasen?
alkalischer pH
Mg2+
Was sind die Eigenschaften der T4-Polynucleotid-Kinase?
Übertragen das 𝛄-Phosphat von ATP auf das 5’-Ende von Nukleotiden
Wofür wird die T4-Polynucleotid-Kinase verwendet?
Phosphorylierung von PCR-Produkten
5’-Endmarikierung von DNA, RNA und Oligonukleotiden
Welche Bedingungen benötigt die T4-Polynucleotid-Kinasen?
Mg2+, ATP, reduzierendes Milieu
Was sind die Eigenschaften der Transferasen?
Hängt Nukleotide an freie 3’-OH Gruppen an
Wofür werden Transferasen verwendet?
Homopolymerschwänze
3’-End Markierung von DNA
