TP1- Avaliação da Resposta Imune no Laboratório de Imunologia

Question 1

O paratopo está no antigénio ou no anticorpo?

Answer 1

Anticorpo

Question 2

O que é valência de um antigénio?

Answer 2

Número máximo de anticorpos que se podem ligar a um antigénio ao mesmo tempo

Question 3

O que é a afinidade entre um antigénio e um anticorpo?

Answer 3

Força de ligação entre um epitopo e um local de ligação do anticorpo. Conjugação de forças atrativas e repulsivas

Question 4

O que é a avidez (conceito aplicado à ligação anticorpo-antigénio)?

Answer 4

Soma de todas as afinidades de um anticorpo. Os múltiplos epitopos de um antigénio estão a interagir com os locais de ligação de um anticorpo

Question 5

Como se chama o processo pelo qual os linfócitos b maturam e adquirem maior avidez?

Answer 5

Hipermutação somática

Question 6

O que ocorre no processo de reatividade cruzada?

Answer 6

Um anticorpo liga-se a mais de um tipo de epitopo, ou uma população de anticorpos liga-se a mais de um tipo de antigénio

Question 7

Que células produzem anticorpos monoclonais ? Que técnica laboratorial é usada para detetar estes anticorpos monoclonais?

Answer 7

Ou são produzidos por uma só célula B, ou por uma mesma linhagem de células B, composta por clones.

São detetados por eletroforese

Question 8

Qual o objetivo das reações de precipitação?

Answer 8

Identificar uma proteína em solução

Question 9

Como se chama a técnica de reação de precipitação em que se forma um anel concêntrico na zona em que ocorre ligação antigénio-anticorpo?

Answer 9

Imunodifusão radial simples ou Técnica de Manciri

Question 10

Na eletroferese, as proteínas migram com base em que parâmetros? (2)

Answer 10

Carga elétrica e peso molecular

Question 11

Na técnica SDS-PAGE (eletroferese em gel de poliacrilamida), por que motivo se adiciona o detergente ?

Answer 11

O detergente:
- liga-se às regiões hidrofóbicas das moléculas proteicas, causando a sua desnaturação em cadeias polipeptídicas estendidas.
- é carregado negativamente e liga-se a proteínas, superando a sua carga intrínseca e fazendo-as migrar em direção ao elétrodo positivo, quando se aplica voltagem

Question 12

Na técnica SDS-PAGE (eletroferese em gel de poliacrilamida), por que motivo se adiciona o beta-mercaptoetanol ?

Answer 12

É um agente redutor que rompe as ligações S-S nas proteínas -> todos os péptidos podem ser analisados separadamente

Question 13

As primeiras proteínas a serem registadas numa tira de eletroferese são as mais leves ou as mais pesadas?

Answer 13

As mais leves

Question 14

Em que técnica é que se formam arcos de precipitação?

• eletroferese
• imunoeletroferese
• imunofixação

Answer 14

Imunoeletroferese

Question 15

Qual é a aglutinina por excelência ?

Answer 15

IgM

Question 16

Para além da IgM, qual é a outra aglutina?

Answer 16

IgG

Question 17

Na hemaglutinação, quais os componentes do sangue que estão envolvidos?

Answer 17

IgG e eritrocitos

Question 18

Quais os nomes das duas técnicas que avaliam a dispersão da luz?

Answer 18

Nefelometria e Turbidimetria

Question 19

O que avalia a Nefelometria?

Answer 19

Avalia a presença ou não de complexos imunes numa amostra, através da luz que, ao bater nestes complexos, é refractada. Quanto mais intensa for a luz refratada, maior é a quantidade de complexos imunes

Question 20

O que avalia a Turbidimetria?

Answer 20

Avalia a presença ou não de complexos imunes numa amostra, através da luz que, mesmo estando presentes complexos, continua a ser transmitida. Quanto mais intensa for a luz transmitida, menor é a quantidade de complexos imunes

Question 21

Na técnica de radioimunoensaio (RIA), se houver muita fluorescência, em resultado de uma elevada ligação marcador radioativo-anticorpo, significa que o antigénio que nós estamos a querer saber se existe naquele doente está em elevada ou baixa quantidade?

Answer 21

Em baixa quantidade. Como o marcador radioativo compete com o antigénio em causa pela ligação aos anticorpos, se houver muita ligação de marcador ao antigénio, com muita emissão de fluorescência, então significa que havia poucas moléculas de antigénio que pudessem competir com o marcador

Question 22

Quantos tipos de ELISA diferentes existem?

Answer 22

3: direta, indireta e em sanduíche (excelente vídeo osmosis)

Question 23

Na ELISA direta, estamos à procura de um antigénio ou de um anticorpo?

Answer 23

Antigénio

Question 24

Na ELISA indireta, estamos à procura de um antigénio ou de um anticorpo?

Answer 24

Anticorpo

Question 25

Na ELISA em sanduíche, estamos à procura de um antigénio ou de um anticorpo?

Answer 25

Antigénio

Question 26

Para que serve a técnica ELISpot?

Answer 26

Avaliar a presença de perforinas e citocinas (!)

Avaliar a eficácia de certas vacinas

Question 27

Na técnica de ensaio imunofluorescente (FIA), para que servem os fluorocromos ou fluoróforos?

Answer 27

Coram partes específicas de células

Question 28

Quais os dois fluorocromos mais usados? Quais as cores que emitem?

Answer 28

Fluoresceína - verde

Tetrametilrodamina - vermelho

Question 29

Como podemos usar a técnica de imunofluorescência adaptada à deteção de alergias?

Answer 29

1. Adicionamos o alergeno de que desconfiamos que o doente é alérgico, ligado a um composto fluorescente (vai ser responsável pela emissão de cor).
2. Adicionamos anticorpos anti-IgE, acoplados a uma enzima que é responsável pela produção de cor (importante adicionar também o substrato desta enzima para que “ela tenha algo com que se alimentar e consiga cumprir a sua função, que é produzir luz”).
3. Se o doente for alérgico ao alergeno que administrámos inicialmente, vai-se produzir muita IgE.
4. A IgE produzida liga-se ao alergeno.
5. À IgE ligam-se os anticorpos anti-IgE que nós adicionámos.
6. Como os anticorpos anti-IgE estavam ligados à tal enzima produtora de cor, e como os alergenos continham um componente capaz de emitir fluorescência, uma vez ocorridas todas as ligações anteriormente descritas, ocorre produção de cor.
7. Assim, sabemos que essa pessoa é alérgica ao alergeno inicialmente administrado.

Question 30

Qual o principal objetivo da técnica de Imunofluorescência Direta?

Answer 30

Detetar antigénios específicos na superfície de certas células, em determinados tecidos

Question 31

Quais os passos de uma técnica de Imunofluorescência direta?

Answer 31

1. No tecido a estudar, administrar um anticorpo contra o antigénio de que estamos à procura, acoplado a um fluorocromo.
2. Eliminar, com lavagens, o excesso de anticorpos que não se ligaram ao tecido.
3. Com um microscópio de fluorescência, verificar se houve formação de um complexo imune (se se tiver formado este complexo imune, vai haver emissão de cor fluorescente)

Question 32

Exemplo de aplicação da técnica de Imunofluorescência indireta.

Answer 32

Deteção de autoanticorpos

Question 33

Na técnica de Imunofluorescência indireta, procuramos um antigénio ou um anticorpo?

Answer 33

Um anticorpo. Usamos uns anticorpos secundários que são contra os anticorpos primários (anticorpos que procuramos). Esses anticorpos secundários estão ligados a um fluorocromo. Se encontrar um anticorpo primário ao qual se possa ligar, emite cor

Question 34

Quais os passos de um Western Blot?

Answer 34

Está técnica é frequentemente usada em situações em que estamos à querer caracterizar melhor alguns anticorpos.
1. Eletroferese em gel SDS de poliacrilamida -> criam-se bandas de acordo com o peso molecular das proteínas do soro daquele doente.
2. Transferência (blotting) dessas proteínas Lara uma membrana estável, uma vez que, por exemplo, se estivermos à procura de uma proteína com 75kDa de peso molecular e se na eletroferese aparecer uma risca na zona dos 75kDa, pode ser devido apenas à proteína que estamos a procurar, mas também podem estar representado nessa banda outras proteínas de 75kDa.
3. Já na membrana estável, pegamos num anticorpo monoclonal direcionado para a proteína de 75kDa de que estamos à procura e adicionamos.
4. Se houver emissão de luz na zona da banda 75kDa, significa que a proteína em estudo é um dos componentes dessa banda

Question 35

Quais os 3 sistemas pertencentes a um citometro de fluxo?

Answer 35

• sistema de fluidos
• sistema ótico
• sistema electrónico

Question 36

Quais os dois tipos de gráficos em que os resultados de uma citometria de fluxo podem ser representados?

Answer 36

Histograma e DOT-PLOT

Question 37

O que faz um imunoensaio?

Answer 37

Deteta uma quantidade específica de uma substância (analito) através da ligação anticorpo-antigénio