Testy immunologiczne Flashcards
czym jest precypitat? jak powstaje?
laczenie sie rozpusczalnego antygenu z rozpuszczalnym przecwicialem - tworzy sie nierozpuszczalny kompleks. Precypitat jest zmetnieniem skladajacym sie z wielu kompleksow polaczanych w siec.
jakie antygeny moga tworzyc precypitaty?
- wielowartosciowe
- o masie 40-140 kDa
- rozpuszczalne
dwuwartosciowosc monogamiczna
laczenie sie dwoch miejsc wiazacych antygen z dwoma determinantami tego samego antygenu, co uniemozliwia wytworzenie sieci i precypitatu
warunki wytworzenia precypitatu
- duze stezenie reagentow, a w szczegolnosci ich rownowaga
- ph 6,4- 8,5
- temperatura dla ludzkich ok.37
- stezenie molowe NaCl 0,15
- uklad dopelniacza- koniecznosc inaktywacji, bo moze doprowadzic do zwiekszeia rozpuszczalnosci
- czas ( kompleks powstaje szybko, precypitat- kilka godzin)
podzial metod precypitacyjnych
- w plynnym, stalym
- jakosciowe, ilosciowe
test w srodowisku plynnym
- szkielkowy- jakosciow- identyfikacja szczepow bakterii
- klaczkujacy- VDRL test na kile- odczyn flokulacyjny
- pierscieniowy- jakosciowy- m. sadowa, pochodzenie plam krwi
test w srodowisku stalym
- pojedyncza dyfuzja plykowa ( radialna)- test ilosciowy
- podwojna immunodyfuzja plytkowa- test jakosciowy i polilosviowy- pokrewienstwo bialek- wspolne, rozne lub identyczne determinanty
Pojedyncza immunodyfuzja plytkowa
przeciwciala uwiezione w zelu agarozowym, anytgeny ruchome. sprawdzenie po 24 h
Immunoelektroforeza
laczy elektroforeze w zelu agarozowym z dyfuzja podwojna. Zastosowanie: - ocena frakcji bialkowych - rozpoznawanie gammapatii - -II- niedoborow immunologicznych
Immunoelektroforeza schreidegera - zastosowamie
nieprawidlowoscie bialek- szpiczak mnogi, ammapatie, niedobory immunologiczne, bialka bence-jonesa
rodzaje immunoelektroforezy
- schreidegera
- rakietkowa
- krzyzowa
zasada dzialania immunoelektroforezy rakietkowej
przy stalym stezeniu ig w podlozu, jej migracja jest wprost proporcjonalna do stezenia
immunoelektroforeza krzyzowa
sluzy do wykrywania antygenu o barzdo niewielkim stezeniu, np hormonow, AFP alfa-fetoproteiny, CEA bialka kacynogennego embrionalnego
czym jest aglutynogen
element upostaciowiony- np. komorka na ktorej pojawia sie antygen, np bakterie, grzyby, erytrocyty, leukocyty, lateks, polistyren
warunki zajscia aglutynacji
- ph 6,8- 7,2
- temperatura: dla zimnych- 4-22 IgM, ok 37 cieple
- sila jonowa- im wyzsza tym lepiej sie lacza
- czas- 15-60 min
podzial aglutynacji
- posrednia
- bezposrednia
odczyn lateksowy
do wykrywania przecwcial rozpuszcalnych. na lateksie znajduja sie antygeny, do ktorych przyczepiaja sie przeciwciala towrzac siec.
do wykrywania ASO-zakazenie paciorkowcem lub RZS
odwrotny test aglutynacji- test ciazowy: lateks z przeciwdzialem + antygen
odczyn hemaglutynacyjny
1) proba krzyzowa i grupy krwi
2) miano w zakazeniach
miano- najwyzsze rozcienczenie surowicy-najmnijesze stezenie ig ktore wywola aglutynacje
co sprawdza proba krzyzowa
zgidnosc ab0 oraz rh
metody znakowania
- radioimmunologiczne
- enzymatyczne
- fluorymetryczne
immunofluorescencja
znaczniki w wyniku pobudzenia emituja odpowiednie swiatlo
jednym z najczesciej stosowanych barwnikow jest FITC( izotiocyjanian fluoresceiny)- swiatlo zielone
1)posrednia
2) bezposrednia
immunofluorescencja bezposrednia
wykrywanie bakterii w materiale pobranym od pacjenta
immunofluorescencja posrednia
ykrywanie immunoglobulin w tkankach, np. w chorobie schonleina henocha, czyli plamicy alergicznej, ktora jest choroba autoimmunologiczna prowadzaca do zapalenia naczyn wlosowatych oporzez odladanie IgA
metody radioizotopowe
izotopy lacza sie z jednym ze skladnikow ag-ab. wykorzystuje sie glownie jod 125 i jod 131
rast- do wykrywania igE anty badany alergen gdy niemzlowi test skorny
rist- do wykrywania calkowitego igE w surowciy
elisa zastosowanie
- bakterie- helicobacter pylori, kila
- autoimmunologiczne- rzs, zapalenie watroby
- choroby wirusowe- wzw, hiv
- nowotwory
- stezenie hormonow
- celiaklia ( przeciwciala przeciwko transglutaminazie)
analiza western blot
polaczenie immunoelektroforezy ze znakowaniem
pozwala na wykryie niemal kazdego antygenu w mieszaninie bialek
test ciazowy charakterystyka
- test immunoenzymatyczny
- wykorzystuje przeciwciala przeciwko lancuchowi beta gonadrotropiny kosmowkowej
kolejne etapy testu ciazowego
- przeciwciala A niezwiazane z nitroceluloza wiazace hormon obecny w probce
- przeciwciala b zwiazene swoiste, wiaza kompleks a-gonadotropina
- przeciwciala c zwiazane, wiaza niezwiazana gonadotropine
