Tema 1 Flashcards
¿Qué estudia la biología molecular?
Los mecanismos que mantienen y expresan la información genética que da lugar a las macromoléculas que constituyen un ser vivo
¿Cuándo y quién descubrió la estructura del DNA?
Watson y Crick, 1953
Dogma central
Replicación del DNA -> Transcripción del DNA -> Traducción del RNAm -> Proteínas
EXCEPCIÓN: retrovirus transcripción inversa
¿La clonación de un organismo siempre da copias idénticas?
No, pueden diferir ligeramente por la regulación de la expresión génica
Clonación DNA. Paso 1.
Obtener un vector recombinante
¿Qué enlaces cortan las endonucleasas de restricción?
Enlaces fosfodiéster
Función DNA ligasa y, ¿necesita una fuentes de energía?
Une fragmentos de DNA y usa ATP en humanos, NAD en bacterias
¿Qué se usa para generar un vector recombinante?
Endonucleasas de restricción y DNA ligasas
Clonación del DNA. Paso 2.
Insertar el vector recombinante en la célula huésped
Clonación del DNA. Paso 3.
Selección de células transformadas (Plásmidos con genes de resistencia a antibióticos) Describir ejemplo de la ampicilina y la tetraciclina.
¿Qué se usa como vector de clonación normalmente? (3)
- Plásmidos
- Cromosomas artificiales bacterianos
- Cromosomas artificiales de levadura
¿Qué es una genoteca? IMPORTANTE
Es una colección de clones de DNA para secuenciar, descubrir genes nuevos o para el estudio de un gen/una proteína.
Las más importantes son la genómicas. Contienen el genoma completo de un organismo en pequeños fragmentos.
¿Cómo se crea una genoteca de cDNA? (Sólo genes que se expresan)
Extraemos RNAm, se sintetiza una cadena de DNA a partir del RNA (transcriptasa inversa) y ese de ese híbrido se crea un DNA de doble cadena
Objetivos de la clonación molecular
En investigación: Identificar genes, determinar la función de genes desconocidos, el estudio del transcriptoma y el proteoma e interacciones DNA-proteína o proteína-proteína
En biotecnología: Vacunas, proteínas de interés (insulina), animales y plantas transgénicas
Medicina: Terapia génica
¿Qué son los vectores de expresión?
Vectores que prmten la expresión de un gen
Diferencias entre vector de clonación y expresión
El de expresión contiene secuencias promotoras, operadoras, de terminación de la transcripción y sitio de unión al ribosoma
¿Qué es una proteína heteróloga?
Proteína de una especie que se inserta y se expresa en otra
Mutagénesis dirigida. Qué se hace y para qué sirve
Se altera la secuencia de nucleótidos del gen clonado y sirve para conocer la estructura y la función de proteínas
Dónde se utiliza la PCR
In vitro
¿Para qué tipo de DNA sirve la PCR?
Para fragmentos de DNA lineal o plásmidos
Funcionamiento de PCR
Se necesita el DNA diana, cebadores, nucleótidos y una DNA polimerasa termodinámicamente estable.
Se calienta el DNA a 95°C para separar las hebras
Se enfría a 50-60°C
Los cebadores se aparean con regiones complementarias del DNA
La polimerasa crea nuevas cadenas de poli nucleótidos 5’ -> 3’
Se repite el proceso
Usos de la separación de DNA por electroforesis
Analizar DNA, purificar el DNA y estudiar interacciones DNA-proteína
Funcionamiento de la separación de DNA por electroforesis
Se crea un campo eléctrico y se introduce un gel de agarosa (relentiza el paso del DNA) y como el DNA tiene carga negativa, se mueve por el campo eléctrico del cátodo al ánodo (+)
¿En qué se basa el genotipado DEL DNA?
En el polimorfismo de secuencia, existen secuencias repetidas cortas (SSR) que e repiten un número distinto de veces en cada uno
¿Para qué sirve el genotipado del DNA?
Para criminalistica y pruebas de paternidad
Método de purificación de proteínas
Cromatografía de afinidad con etiquetado de proteínas
Cromatografía de afinidad
El gen deseado se une a otro (etiqueta) que tiene gran afinidad con un ligando específico. Esa se llamará proteína de fusión. Esta será introducida en una columna que contiene el ligando y las proteínas que estén unidos a la etiqueta quedarán retenidos en la columna.
Y
H
