Tema 1

Question 1

¿Qué estudia la biología molecular?

Answer 1

Los mecanismos que mantienen y expresan la información genética que da lugar a las macromoléculas que constituyen un ser vivo

Question 2

¿Cuándo y quién descubrió la estructura del DNA?

Answer 2

Watson y Crick, 1953

Question 3

Dogma central

Answer 3

Replicación del DNA -> Transcripción del DNA -> Traducción del RNAm -> Proteínas

EXCEPCIÓN: retrovirus transcripción inversa

Question 4

¿La clonación de un organismo siempre da copias idénticas?

Answer 4

No, pueden diferir ligeramente por la regulación de la expresión génica

Question 5

Clonación DNA. Paso 1.

Answer 5

Obtener un vector recombinante

Question 6

¿Qué enlaces cortan las endonucleasas de restricción?

Answer 6

Enlaces fosfodiéster

Question 7

Función DNA ligasa y, ¿necesita una fuentes de energía?

Answer 7

Une fragmentos de DNA y usa ATP en humanos, NAD en bacterias

Question 8

¿Qué se usa para generar un vector recombinante?

Answer 8

Endonucleasas de restricción y DNA ligasas

Question 9

Clonación del DNA. Paso 2.

Answer 9

Insertar el vector recombinante en la célula huésped

Question 10

Clonación del DNA. Paso 3.

Answer 10

Selección de células transformadas (Plásmidos con genes de resistencia a antibióticos) Describir ejemplo de la ampicilina y la tetraciclina.

Question 11

¿Qué se usa como vector de clonación normalmente? (3)

Answer 11

1. Plásmidos
2. Cromosomas artificiales bacterianos
3. Cromosomas artificiales de levadura

Question 12

¿Qué es una genoteca? IMPORTANTE

Answer 12

Es una colección de clones de DNA para secuenciar, descubrir genes nuevos o para el estudio de un gen/una proteína.

Las más importantes son la genómicas. Contienen el genoma completo de un organismo en pequeños fragmentos.

Question 13

¿Cómo se crea una genoteca de cDNA? (Sólo genes que se expresan)

Answer 13

Extraemos RNAm, se sintetiza una cadena de DNA a partir del RNA (transcriptasa inversa) y ese de ese híbrido se crea un DNA de doble cadena

Question 14

Objetivos de la clonación molecular

Answer 14

En investigación: Identificar genes, determinar la función de genes desconocidos, el estudio del transcriptoma y el proteoma e interacciones DNA-proteína o proteína-proteína

En biotecnología: Vacunas, proteínas de interés (insulina), animales y plantas transgénicas

Medicina: Terapia génica

Question 15

¿Qué son los vectores de expresión?

Answer 15

Vectores que prmten la expresión de un gen

Question 16

Diferencias entre vector de clonación y expresión

Answer 16

El de expresión contiene secuencias promotoras, operadoras, de terminación de la transcripción y sitio de unión al ribosoma

Question 17

¿Qué es una proteína heteróloga?

Answer 17

Proteína de una especie que se inserta y se expresa en otra

Question 18

Mutagénesis dirigida. Qué se hace y para qué sirve

Answer 18

Se altera la secuencia de nucleótidos del gen clonado y sirve para conocer la estructura y la función de proteínas

Question 19

Dónde se utiliza la PCR

Answer 19

In vitro

Question 20

¿Para qué tipo de DNA sirve la PCR?

Answer 20

Para fragmentos de DNA lineal o plásmidos

Question 21

Funcionamiento de PCR

Answer 21

Se necesita el DNA diana, cebadores, nucleótidos y una DNA polimerasa termodinámicamente estable.

Se calienta el DNA a 95°C para separar las hebras
Se enfría a 50-60°C
Los cebadores se aparean con regiones complementarias del DNA
La polimerasa crea nuevas cadenas de poli nucleótidos 5’ -> 3’
Se repite el proceso

Question 22

Usos de la separación de DNA por electroforesis

Answer 22

Analizar DNA, purificar el DNA y estudiar interacciones DNA-proteína

Question 23

Funcionamiento de la separación de DNA por electroforesis

Answer 23

Se crea un campo eléctrico y se introduce un gel de agarosa (relentiza el paso del DNA) y como el DNA tiene carga negativa, se mueve por el campo eléctrico del cátodo al ánodo (+)

Question 24

¿En qué se basa el genotipado DEL DNA?

Answer 24

En el polimorfismo de secuencia, existen secuencias repetidas cortas (SSR) que e repiten un número distinto de veces en cada uno

Question 25

¿Para qué sirve el genotipado del DNA?

Answer 25

Para criminalistica y pruebas de paternidad

Question 26

Método de purificación de proteínas

Answer 26

Cromatografía de afinidad con etiquetado de proteínas

Question 27

Cromatografía de afinidad

Answer 27

El gen deseado se une a otro (etiqueta) que tiene gran afinidad con un ligando específico. Esa se llamará proteína de fusión. Esta será introducida en una columna que contiene el ligando y las proteínas que estén unidos a la etiqueta quedarán retenidos en la columna.

Question 28

Y

Answer 28

H