Técnicas de Coloração Flashcards
Enumere as etapas de preparação de lâminas para estudo histológico
Fixação, Desidratação, Inclusão, Microtomia e Coloração
Descreva o processo de Fixação e sua função
MO usa formol ou gutaraldeído (combina com o grupo amina e estabiliza a estrutura quaternária –> coagula proteínas). ME usa tetróxido de osmio ou gutaraldeído. Preserva a morfologia e a composição dos tecidos, evita a autólise, impede atividade celular e proliferação de bactérias, e aumenta o contraste e a afinidade de uma amostra por corantes.
Descreva o processo de Desidratação e sua função
Tira-se a água e embebe-se a peça em substâncias [xilol ou etanol (MO) ou acetona (ME)] miscíveis em parafina, que, como consequência, clareia a peça.
Descreva o processo de Inclusão e sua função
A peça é colocada em molde contendo parafina (MO ou resina plástica ME) fundida, que envolve o material e nele penetra.
Descreva o processo de Microtomia e sua função
Cortes delgados nas peças em micrótomo (1-10 micrometros). Há diferentes planos de corte, os quais influenciam a identificação de estruturas no microscópio.
Descreva o processo de Coloração e sua função
Uso de corantes para evidenciar os componentes dos tecidos. ME não usa.
O que a técnica histológica (THL) evidencia?
Morfologia
Qual é o tipo mais comum de coloração da THL?
HE (Hematoxilina-Eosina)
Descreva as características do corante ácido na THL
Aniônico, combina-se com estruturas básicas (citoplasma), que são catiônicas e acidófilas; ex: Eosina
Descreva as características do corante básico na THL
Catiônico, combina-se com estruturas ácidas (núcleo), que são aniônicas e basófilas; ex: Hematoxilina
O que são imagens negativas?
Cavidades, capilares sanguíneos, estruturas mal preservadas
Como saber se uma célula tem alta ou baixa atividade metabólica proteica (AMP)?
Pouco Corada –> alta AMP
Muito Corada –> baixa AMP
Como identificar diferentes células na MO?
A MO não vê membrana, então considera-se cada núcleo uma célula diferente, porém em algumas lâminas, consegue-se separar as células pelo contraste da Matriz Extracelular
O que a técnica histoquímica (THQ) evidencia?
Localização e identificação da natureza química
O que é a contra-coloração?
Aplicar uma técnica histológica em cima de uma histoquímica
Quais são as características gerais da THQ?
- preservação e imobilização adequadas
- sensibilidade (detecção de pequenas quantidades)
- reação deve ser conhecida
- especificidade (contra-prova)
Qual natureza química a coloração Periodic-Acid Schiff (PAS) evidencia?
Demonstra a presença de 1,2 glicol (-COH-COH-), comumente encontrado no glicogênio (músculo e fígado), em glicoproteínas neutras e ácidas, no amido e na celulose. O TECIDO CONJUNTIVO TEM MUITO
Descreva as etapas da coloração de PAS?
- preparação do reagente de schiff: fuccina básica (magenta) + ácido sulforoso (H2SO3)= reativo de schiff (incolor)
- oxidação, pelo ácido periódico (HIO4), dos radicais 1,2-glicol, formando aldeído, que se deposita no tecido
- reversão da cor: aldeído + reativo de schiff= cor magenta (PAS+)
- contra-prova: confirmação da presença específica de glocogênio em lâmina controle, submetida a tratamento prévio com amilase salivar (degrada glicogênio)
4.1 submete-se essa lâmina a PAS- se não corar (PAS-), tem glicogênio
- se corar (PAS+), não tem (só) glicogênio
Como interpretar a coloração de PAS?
PAS+ –> cor magenta –> indica a presença do radical 1,2-glicol na lâmina
PAS- –> não cora –> não tem radical 1,2-glicol
O que a técnica Alcian-Blue (AB) evidencia?
Radicais ácidos em pH específico
Como funciona a técnica AB?
AB tem afinidade por grupos carboxila (COOH - pH 2,5) e sulfato (SO4 - pH 2,5 e 5), presentes em glicoproteínas e glicosaminoglicanas. Quando uma amostra tem esses grupos de uma reação AB+, de cor azul claro
Como funciona a Impregnação pela prata?
Deposição de cromato de prata (cristal marrom), fácil ver estruturas do SN
Como funciona a reação de Feulgen?
Demonstra aldeídos liberados; reação de feulgen+ –> magenta;
1. hidrólise do DNA com HCl a 60°C para liberação de aldeídos
2. tratamento dos aldeídos liberados com reativo de schiff
