Técnicas de Coloração

Question 1

Enumere as etapas de preparação de lâminas para estudo histológico

Answer 1

Fixação, Desidratação, Inclusão, Microtomia e Coloração

Question 2

Descreva o processo de Fixação e sua função

Answer 2

MO usa formol ou gutaraldeído (combina com o grupo amina e estabiliza a estrutura quaternária –> coagula proteínas). ME usa tetróxido de osmio ou gutaraldeído. Preserva a morfologia e a composição dos tecidos, evita a autólise, impede atividade celular e proliferação de bactérias, e aumenta o contraste e a afinidade de uma amostra por corantes.

Question 3

Descreva o processo de Desidratação e sua função

Answer 3

Tira-se a água e embebe-se a peça em substâncias [xilol ou etanol (MO) ou acetona (ME)] miscíveis em parafina, que, como consequência, clareia a peça.

Question 4

Descreva o processo de Inclusão e sua função

Answer 4

A peça é colocada em molde contendo parafina (MO ou resina plástica ME) fundida, que envolve o material e nele penetra.

Question 5

Descreva o processo de Microtomia e sua função

Answer 5

Cortes delgados nas peças em micrótomo (1-10 micrometros). Há diferentes planos de corte, os quais influenciam a identificação de estruturas no microscópio.

Question 6

Descreva o processo de Coloração e sua função

Answer 6

Uso de corantes para evidenciar os componentes dos tecidos. ME não usa.

Question 7

O que a técnica histológica (THL) evidencia?

Answer 7

Morfologia

Question 8

Qual é o tipo mais comum de coloração da THL?

Answer 8

HE (Hematoxilina-Eosina)

Question 9

Descreva as características do corante ácido na THL

Answer 9

Aniônico, combina-se com estruturas básicas (citoplasma), que são catiônicas e acidófilas; ex: Eosina

Question 10

Descreva as características do corante básico na THL

Answer 10

Catiônico, combina-se com estruturas ácidas (núcleo), que são aniônicas e basófilas; ex: Hematoxilina

Question 11

O que são imagens negativas?

Answer 11

Cavidades, capilares sanguíneos, estruturas mal preservadas

Question 12

Como saber se uma célula tem alta ou baixa atividade metabólica proteica (AMP)?

Answer 12

Pouco Corada –> alta AMP
Muito Corada –> baixa AMP

Question 13

Como identificar diferentes células na MO?

Answer 13

A MO não vê membrana, então considera-se cada núcleo uma célula diferente, porém em algumas lâminas, consegue-se separar as células pelo contraste da Matriz Extracelular

Question 14

O que a técnica histoquímica (THQ) evidencia?

Answer 14

Localização e identificação da natureza química

Question 15

O que é a contra-coloração?

Answer 15

Aplicar uma técnica histológica em cima de uma histoquímica

Question 16

Quais são as características gerais da THQ?

Answer 16

1. preservação e imobilização adequadas
2. sensibilidade (detecção de pequenas quantidades)
3. reação deve ser conhecida
4. especificidade (contra-prova)

Question 17

Qual natureza química a coloração Periodic-Acid Schiff (PAS) evidencia?

Answer 17

Demonstra a presença de 1,2 glicol (-COH-COH-), comumente encontrado no glicogênio (músculo e fígado), em glicoproteínas neutras e ácidas, no amido e na celulose. O TECIDO CONJUNTIVO TEM MUITO

Question 18

Descreva as etapas da coloração de PAS?

Answer 18

1. preparação do reagente de schiff: fuccina básica (magenta) + ácido sulforoso (H2SO3)= reativo de schiff (incolor)
2. oxidação, pelo ácido periódico (HIO4), dos radicais 1,2-glicol, formando aldeído, que se deposita no tecido
3. reversão da cor: aldeído + reativo de schiff= cor magenta (PAS+)
4. contra-prova: confirmação da presença específica de glocogênio em lâmina controle, submetida a tratamento prévio com amilase salivar (degrada glicogênio)
   4.1 submete-se essa lâmina a PAS
   
   • se não corar (PAS-), tem glicogênio
   • se corar (PAS+), não tem (só) glicogênio

Question 19

Como interpretar a coloração de PAS?

Answer 19

PAS+ –> cor magenta –> indica a presença do radical 1,2-glicol na lâmina
PAS- –> não cora –> não tem radical 1,2-glicol

Question 20

O que a técnica Alcian-Blue (AB) evidencia?

Answer 20

Radicais ácidos em pH específico

Question 21

Como funciona a técnica AB?

Answer 21

AB tem afinidade por grupos carboxila (COOH - pH 2,5) e sulfato (SO4 - pH 2,5 e 5), presentes em glicoproteínas e glicosaminoglicanas. Quando uma amostra tem esses grupos de uma reação AB+, de cor azul claro

Question 22

Como funciona a Impregnação pela prata?

Answer 22

Deposição de cromato de prata (cristal marrom), fácil ver estruturas do SN

Question 23

Como funciona a reação de Feulgen?

Answer 23

Demonstra aldeídos liberados; reação de feulgen+ –> magenta;
1. hidrólise do DNA com HCl a 60°C para liberação de aldeídos
2. tratamento dos aldeídos liberados com reativo de schiff