Strategisk proteinrening Flashcards
varför vill man isolera ett protein?
- struktur
- funktion
- enzymkinetik
- terapi
- studera
Vad har proteiner för egenskaper?
- laddning
- storlek
- posttranslationella modifiering
- unik sekvens
Vad är målet med strategisk proteinrening?
- > att hitta den bästa vägen från startmatrialet till slutprodukt
- > Att få ett högt utbyte av en biologiskt aktivitet från protein.
- > Att proteinet har en hög renhet.
Vad finns det för övergripande principer för strategisk proteinrening?
- preparera, extrahera och få proteinet vattenlösligt
- isolera, koncentrera och stabilisera
- Få bort orenheter /andra proteiner
- Addera steg för ytterligare renhet
Innan rening av protein måste ett antal steg gås igenom, vilka?
- val av utgångsmaterial
- överföring proteiner till vattenfas
- val av renings metod
- verifiering av renhet (aktivitet och absorbans)
Varför vill man överföra proteiner till vattenfas?
proteinet i celler/vävnader måste sönderdelas.
- kemiskt: genom organiska lösningsmedle, detergenet mm.
- mekaniskt: mixa, skaka med glaspärlor.
Vad används för separations tekniker ?
- centrifug
- filtrering
- kromatografi
(avsaltning)
Hur fungerar centrifugen ?
- fungerar med cetrifugalkraft.
- de partiklar med högst densitet hittas i botten av röret.
- de lättare partiklarna bildar tunna skikt ovanför.
Vad kan man använda sig för kromatografi tekniker?
- jonbyteskromatografi
- gelfiltrering
- affinitetskromatografi
Hur fungerar det med laddade partiklar i jonbyteskromatografi?
Eluera genom aD =llsäDa salt (NaCl).
Cl- för anjonbytareoch Na+ för katjonbytare.
- Alternativt sänk pH till IP för anjonbytare och för katjonbytare höj pH >IP.
Hur fungerar jonbyteskromatografi generellt?
separerar molekyler utifrån laddning.
Så en med:
- Anjonbytare, separerar proteiner med neg. laddning
- Katjonbytare, separerar proteiner med pos. laddning.
Hur fungerar gelfiltrering ?
Separerar med avseende på storlek.
När används affinitetskromatograf?
Användandet av cellkulturer och rekombinant uttryck av proteiner möjliggör introduk=on av utvalda aminosyrasekvenser för att underlätta rening och detektion.
