Spektroskopi Flashcards
Vad är spektroskopi?
Analys av molekyler genom att studera det spektrum som uppkommer när molekylen absorberar och/eller emitterar elektromagnetisk strålning.
Vad finns det för typer av spektroskopi?
- UV-vis Spektrofotometri
- Fluorescens
- Röntgenkristallografi
- NMR
Vad är det vi kan se och varför kan vi inte se vissa våglängder?
Våra ögon är anpassade efter en viss våglängd utanför detta kan våra ögon inte se.
- vid 400nm våglängd vid “lila” ljus finns röntgen och UV ljus.
- uppmot 700 nm finns infraljus och mikrovågor.
Vilket ljus har mest energi?
Det blåa ljuset
Vad gör UV-vis spektrofotometern?
Elektroner kan absorbera ljus (foton) och “hoppa” upp från HOMO till LUMO = excitation. Våglängden på ljuset (energin) måste matcha AE (A står för rektangeln)
Hur fungerar mättning av spektrofotometern?
Om provet skulle innehålla klorofyll som ör grönt kan inte grönt ljus användas för klorofyll absorberar inte detta ljus.
Men skulle vi använt blått ljus skulle det gett utslag, för att klorofyll absorberar de blåa ljuest.
hur mäter vi ett prov i spektrofotometern?
Använder oss av kyvetter, finns ofta fler platser än en för kyvetterna.
-> en kvartkyvett används vid våglängder <380nm (glas och plast absorberar ljus <320 nm)
När mäts ALAT? vad måste vi tillsätta?
Alaninaminotransferas! ALAT finns normalt i cytoplasman hos leverceller, men frisläpps till blodet vid cellskada. Detta mätts vid misstänkt leverproblem.
-> vi vill sätta till NADH- för att vi vill se om vi har enzymet närvarande. NADH försvinner och omvandlas till NAD+ detta mäts av spektrofotometern.
Vad ör ELISA för metod?
Används för att kvantifiera och detektera en antikropp eller antigen.
-> metoden används för att bestämma antikroppar som produceras som svar på en virusinfektion, eller autoimmun sjukdom. eller för att bestämma cancermarkörer.
Hur fungerar ELISA?
- Väljer antigen som ska tillsättas.
- Tillsätter sedan ospecifika protein för att vi vill undvika en ospecifik inbidning.
- Tillsätter primär antikropp, mot sepcifika antigenet
- Tillsätter sekundär antikropp-enzym kopplex som binder till primär antikropp.
- Sedan tillsätter man substratet
- Om färgade “former” presenteras indikerar det i specifikt antigen
Vad är fluorescens ?
Elektroner kan avge foton när den “faller ner” från det exciterade tillståndet =relaxation.
Jämförelse mellan UV-vis spektrofotmeri och Fluorescens?
- > UV-vis Spektrofotometri: ljus kommer in och ljus åker ut, absorbans okänslig metod
- > fluorescens: det fluorescerande vågljuset mätts på annan våglängd. Mäter vid 90 graders vinkel och stänger ut det gula ljuset från detektorn. detta är en känslig metod om man jämför med UV-vis.
Vad används röntgenkristallografi till?
För att bestämma proteinstrukturer. Det behövs en proteinkristall och en speciell röntgenutrustning
90% av proteinstrukturerna är lösta med röntgenkristallografi.
En del av strukturerna är lösta i komplexmed med en ligand eller en inhibitor.
- Datamoduleringen används för att docka in läkemedelskandidater i bindningsfickor på kända proteinerstrukturer.
Hur fungerar NMR?Nuclear magnetic resonance
- > Många atomkärnor har ett magnetiskt moment. Om de sätts i ett starkt magnetfält så spinner kärnan och de ställer in sig “med” eller “mot” magnetfältet.
- > Energinivån för de två tillstånden är inte samma. Fler kommer att befinna sig i den lägre energinivån. När kärnorna utsätts för strålning med rätt energi exciteras de med lägre energi upp till den högre energinivån. Med tiden relaxerar de tillbaka (flippar tillbaka) och de avger då radiofrekvent strålning med samma frekvens som de exciterades med.
Hur kan man få fram atom antal utifrån toppar i kromatogram ?
proton NMR är den vanligaste nukliden som studeras. Energiskillnaden är inte samma för alla protonkärnor i en molekyl. Kärnorna omges av bindningarnas elektroner som skärmar av det pålagda magnetfältet. Det lägre effektiv magnetfältet ger upphov till ett skift i energiskillnad
- Skiftskillnaden mäts i ppm och beskriver vilken omgivning olika protoner har.
- Två väten som sitter två eller tre bindningar ifrån varann känner av varandras kärnor och de “kopplar” med varandra. Det ger upphov till splittade toppar.
- Storlekarna på topparna (Integralerna) är direkt proportionella med hur många atomer det står för. (en CH3 topp är tre gånger större än en OH topp)
