Spectrofluorimétrie Quinine + chlorures

Question 1

Intro-Propriétés spectre excitation/émission quinine

Answer 1

Absorbe ds UV

Émet ds visible

Question 2

Intro-Échantillon commercial

Answer 2

Eau Tonique Nos Comliments

Question 3

Intro- Quels autres trucs vs avez faits

Answer 3

Spectre excitation/émission pour quinine et nitrate d’uranyle

Question 4

Intro-Objectif du lab = quoi

Answer 4

Familiarise étudiant avec méthode analyse spectrofluorimétrique ds lab quantitatif

Question 5

Intro-Comparer deux méthodes d’étalonnage, lesquelles + analyses faites (quinine, chlorure?)

Answer 5

Ajouts dosés vs étalonnage

Analyse:

• analyse qunine
• extinction (quenching) de la fluorescende la quinie par les ions chlorures

Question 6

Intro-Modèle de l’instrument

Answer 6

Aminco-Bowman série 2

Question 7

Intro-Source = quoi + caractéristiques ( 2+ et pourquoi et 1 - et sln)

Answer 7

Lampe Xe

+: Forte intensité lumineuse, émet continuum de raies donc besoin monochromateur

Intensité signal est proportionnel à lumière incidente

-: Fluctuation de l’intensité lumineuse ds le temps

Sln pour fluctuation de source- deux PMT (1 détecteur pour la source et un pour l’échantillon)

Question 8

Intro-Comment ça marche en terme de monochromateur + plusieurs monochromateurs + nom du détecteur et plusieurs en fct de excitation et émission + placés où?

Answer 8

Excitation

1) Lumière produite par source passe par monochromateur pour n’émettre sur l’échantillon qu’une longueur d’onde à la fois

PMT référence pour me surer intensité fluctuante de la source, placé entre monochromateur excitation et échantillon

Émission

2)Lumière émise par fluorescence passe ds un autre monochromateur et est captée par détecteur type PMT

PMT pour mesurer intensité de la fluorescence émise par l’échantillon, placé après le monochromateur d’émission

Question 9

Intro-Détecteur PMT (photomultiplier tube)est composé de quoi-physiquement + fait quoi

Answer 9

Ampoule de verre sous vide contenant photocathode et une série d’anodes

Multiplie le signal électrique généré par chaque photon

Effet de cascade

Question 10

Intro-Photocathode dans PMT (détecteur- photomultiplier tube) marche comment (oui, oui, vous aurez pas toute la réponse, mais plusieurs questions séparées= dla marde si elles sont pas posées à la suite)!

Answer 10

Plaquette verrre recouverte fine couche semi-conducteur déposé

Photon frappe cathode = couple trou-électron. Cet é- est éjecté de la photocathode à cause d’une grande différence de potentiel

É- va à la première anode puis aux anodes suivantes

Différence entre chaque anode = plus grande différence de potentiel que la précédente

Question 11

Intro-Détecteur PMT -caractéristiques générales + 1 problème de ce détecteur

Answer 11

Très sensible
Maximise valeur transmise pour quantité lumière reçue

So, si tu en as trop sur le détecteur, tu peux le brûler, car l’amplification va être trop grande

Question 12

Intro-axe du détecteur est à 90 degrés par rapport au faisceau d’excitation

Answer 12

Minimiser l’intensité lumineuse incidente en provenance de la source, car on veut juste l’intensité de la fluorescence

Question 13

Intro-Miroirs + fentes servent à quoi

Answer 13

Miroirs= converger / diverger faisceaux

Fentes ajustables permettant de doser la lumière employée

Question 14

Intro-Pour ce lab, est-ce que j’aurais pu prendre une cellule de verre

Answer 14

Non, longueur d’onde ds UV et verre bloque une partie importante des UV, donc prendre cellule quartz

Question 15

Intro-Comment déterminer lambda excitation et émission

Answer 15

1 Mesuré par spectre 3D du niveau de fluorescence selon lambda chacun des 2 paramètres

Permet d’évaluer où sont les maximas

2

Spectre émission: mesuré intensité fluorescence à lambda excitation fixe

Spectre excitation: mesuré intensité fluorescence à lambda émission fixe

Pour connaître précisément les lambdas à utiliser

Question 16

Intro- Pourquoi analyser le nitrate d’uranyle + acide + spectres uranyle vs quinine

Answer 16

Pourquoi: analyse d’un autre composé fluorescent

Ions uranyle qui font fluorescence, présence orbitales F

pourquoi acide? = assurer solubilité ions uranyle

Spectre uranyle vs quinine:

• uranyle = molécule simple, pics mieux différenciés et résolus, car moins de niveaux vibrationnels
• quinine- pics se superposent

Question 17

Intro-Étalonnage externe vs ajouts dosés- OK encore shitload de stock mais ouin….

Answer 17

Étalonnage externe:

• caractéristiques = simple, peu manip, gradient concentration analyte (dilution SM quinine en poudre à 90% + acide= garder solubilité)
• avantages = peu manip vs ajouts dosés, plus facile que grosses manip de ajouts dosés pour gens ayant peu d’expérience en labo

Ajouts dosés:

• robuste
• V inconnu à doser = ajouté à chacun des étalons qui contiennent un gradient de concentration analyte
• but = limiter effets de matrice qui pourraient avoir une influence si un autre composé était fluorescent ou phosphorescent aux lambdas employées
• est-ce qu’il y a un blanc en ajouts dosés, non, contient un volume d’inconnu mais pas d’étalon
• volume inégal de sln dans le contenant? non, validité méthode en dépend

Question 18

Intro- Extinction, autre nom + ce que ça fait avec quel composé

Answer 18

Autre nom = quenching

Extinction des propriétés fluorescentes de la quinine par les ions chlorures du nacl

Question 19

Intro-Extinction dynamique ou statique + relation proportionnelle entre l’agent d’extinction et la molécule de quinine?

Answer 19

Dynamique, car désactive fluorescence quinine par collision

Quenching est pas proportionnel à un ion cl- pour une molécule de quinine

Question 20

Intro-Extinction statique veut dire quoi

Answer 20

Agent ajouté (ex chlorure) formerait un complexe avec l’analyte qui n’est pas actif en fluorescence

Question 21

Théorie-Diffusion Raman-apparait sur spectre de quoi?

Answer 21

Transfert d’une partie de la radiation excitatrice au solvant sous forme d’énergie de vibration-émission

Question 22

Théorie-Diffusion Rayleigh-apparait sur spectre de quoi?

Answer 22

Réémission, par le solvant, d’une fraction de la radiation excitatrice à la même longueur d’onde-émission

Question 23

Théorie-Déplacement de Stokes

Answer 23

Lumière produite en fluorescence est tjrs décalée vers le rouge

Question 24

Théorie- E excitation plus grande ou plus petite que E émission?

Answer 24

Plus grande, car électron perd de l’énergie entre la phase d’excitation et la phase d’émission (relaxation)

Question 25

Théorie-Quelle longueur d’onde est plus grande excitaiton ou émission?

Answer 25

Longueur d’onde émission est tjrs plus grande que longueur d’onde d,excitation

Question 26

Discussion-Analysé quoi par méthode d’ajouts dosés?

Answer 26

Eau tonique Nos Compliments

Question 27

Discussion-Valeur référence pour la quinine ds l’eau tonique sur la bouteille?

Answer 27

Non, valeur FDA

Question 28

Discussion- pourquoi durant mesure instrument était réglé à 60% au lieu de 80% (aucune idée de l’unité….)

Answer 28

À 80%, détecteur était saturé, donc diminuer pour éviter d’endommager le PMT, trop de luimière= le faire cramer

Question 29

Discussion-Biais sur résultats (3) + conséquences

manque auto-absorption

Answer 29

1) préparation des étalons pour l,ajout dosé = bcp manip (pesée quinine solide, mise en sln, dilution SM, dilution H2O tonique, préparation des étalons)

possible pertes de transfert

2) Mesure prise par instrument variait avec le temps: moyenne des valeurs ponctuelles = pas nécessairement vraie valeur moyenne
3) pouvoir fluoresence de la quinine diminuaut quand échantillon restait longtemps ds l’instrument

hypothèse= intensité lampe Xe trop élevée= endommagerait la molécule, donc diminuerait propriétés fluorescentes de la quinine= sous-estimation concentration

Question 30

Discussion-Auto-absorption = quoi?

Answer 30

Molécules analytes excitées émettent lambda qui est aussi une raie d’absorption de cet analyte. Donc, photon produit par fluorescence ne se rend pas au détecteur et on sous-estime concentration

Important si concentration élevée, car ça se passe plus

Question 31

Discussion-Quenching-quel composé le fait

Answer 31

Ion chlorure

Question 32

Discussion-graphique de Intensité signal en fonction de concentration chlorure donne quoi comme allure + indique quel type de quenching

Answer 32

Relation logarithmique, plateau atteint rapidement donc quenching dynamique

Question 33

Discussion- graphique pour quenching statique

Answer 33

Linéaire

Question 34

Discussion-avantages de spectrofluorimétrie (3)

Answer 34

Non-destructrice
Peu sln pour fonctionner (seulement ce qu’il y a ds la cellule)
Coûteux à l’achat, mais moins cher que HPLC mettons, car pas de volumes importants d’éluants

Question 35

Discussion-quels analytes en spectrofluorescence

Answer 35

Échantillons qui fluorescent

Question 36

Discussion- poursuite en terme de réplicas pour améliorer

Answer 36

Faire plus de réplicas pour diminuer influence de la variation de l’intensité de la lampe

Mais il y a aussi le PMT pour compenser les variations de la source….