HPLC Acide acétylsalicylique + caféine Flashcards
Intro-Analytes
Acide acétylsalicylique + caféine
Intro-Échantillon commercial + marque
Comprimé analgésique marque Stanley
Intro-Utilité boucle injection
Avoir volume exact
Intro-Colonne de garde fait quoi + est composé de quoi
Éviter boucher colonne avec particules en suspension qui auraient pu rester dans l’échantillon
PS (phase stationnaire)= mm que colonne de chromato
Intro-Pourquoi varier proportions d’éluants
Obtenir gradient de polarité le plus adapté à la situation
Intro-Éluant = composé de quoi
Méthanol + acide acétique dilué
Intro-Caractéristique principale pour être HPLC
Être sous pression
Pas certaine de la pertinence so et je présume que c’est pas généralisé?
Intro- 400 PSI de plus que ce que dit le protocole, pourquoi
Changement colonne, PS plus fine = freine passage liquide
Intro- Type détecteur
Détecteur UV-Vis
Intro-Lambda analyse = quoi + pourquoi celle là (2)
275 nm
caféine absorbe le plus à cette longueur d’onde
1)compromis entre absorbance des 2 analytes
2)éviter interférence, car éluant absorbe pas à cette lambda
Intro-Comment déterminer efficacité: nom du calcul (#1)+ provient de quelles données obtenues durant analyse (#2)
1)Résolution + nombre plateaux,
2) Distance entre les pics
Largeur des pics
Théorie- concept global du HPLC pour la séparation
Différence affinité de certains composés à se séparer selon la PS et la PM
Théorie- Quel type PS pour l’analyse?
C18 non polaire
Théorie-HPLC en phase inverse veut dire quoi
PS= non polaire, C18 PM= polaire, acide acétique + méthanol
Truc pour inverse:
Tu es mince, tu vas aux States où le monde est gros, tu es à l’inverse de la population; la population = grosse =PS =gras=C18=non polaire
PM est polaire
Théorie-En phase inverse, quels type (polaire ou non) sortent en premier et pourquoi
Composés polaire, car affinité avec PM
Théorie-composés moins polaire sortent quand en phase inverse vs polaire et pourquoi
Plus loin, car affinité avec PS
Intro- HPLC marque modèle
UltiMate 3000 de la compagnie Dionex (Thermo Scientific) avec pompe quaternaire
Discussion-Gradient choisi
64% MeOH, 36% acide acétique
Discussion-pourquoi caféine était la plus polaire
atome azote hétérocycles = protonés ds milieu acide (acide acétique)
Discussion-Prend quoi comme valeur selon Skoog pour avoir une bonne résolution
Résolution= 1.5
Discussion- définition du nombre de plateaux théoriques
Nombre d’interactions où il y a équilibre de l’analyte entre la PM et la PS (Skoog p.769), mais en réalité ça se passe pas, car l’éluant est en mouvement constant donc pas de vrai équilibre
Discussion-Hauteur équivalente d’un plateau théorique + vient d’où
Vient du nombre plateaux théoriques
Égale valeur fictive de la distance entre les différents équilibres de analyte entre PS et PM (les plateaux théoriques)
Discussion-à 275 nm, il se passe quoi pour l’absorptivité molaire caféine et AAS
Plus grande pour caféine et AAS plus faible, hypothèse, absorptivité molaire serait plus faible peut importe concentration et longueur d’onde. Faudrait checker la valeur attendue pour chacune.
DiscussionAvantages HPLC avec pompe quaternaire(3)
1) faire gradient ds PM, optimiser séparation, car on a 4 pompes. Si 1 pompe, faudrait faire le mélange avant (dans une bouteille), une seule concentration possible.
2) requière petits volumes échantillons
3) temps opération moyennement court (mais dépend de la complexité de l’analyse et du nbr d’analytes-CFL)
Discussion-Désavantages HPLC (2)
1) Échantillon va ds les déchets
,mais en théorie, c’est comme une colonne de silice, on pourrait récupérer les différents analytes en amenant le tuyau du déchet ds un bécher mettons)
2) conso élevée de solvants = $$$$$
Discussion-Avantages de la boucle d’injection (3)
1) volume exact injecté ds la colonne
2) diminuer imprécision vs injection manuelle
3) signal réplicable
Discussion-Pertinent utiliser étalon interne O/N et pourquoi
N, volume fixé
Discussion- «Fronting», allure
pente raide + finit progressivement
Discussion- «Fronting», pourquoi ça se passe (2)
1) Trop grande affinité entre analyte et PS = étalement
2) saturation de la colonne, trop grande concentration analyte
Calcul- masse aas ds comprimé, formule générale
(masse AAS ds échantillon/masse échantillon prélevé ) * masse comprimé total
Conclu-pourquoi pas avoir pris les autres ratios pour le gradient
compromis entre séparation des pics, étalement et temps de séparation (ou temps de rétention)
Conclu-diminuer le fronting comment pour échantillon commercial
Dilué, car fronting peut venir de la saturation de la colonne
Conclu-Amélioration pour les étalons, diminuer incertitude
Prendre un plus grand volume
= diminue incertitude sur les résultats calculés + erreur relative plus faible
