HPLC Acide acétylsalicylique + caféine

Question 1

Intro-Analytes

Answer 1

Acide acétylsalicylique + caféine

Question 2

Intro-Échantillon commercial + marque

Answer 2

Comprimé analgésique marque Stanley

Question 3

Intro-Utilité boucle injection

Answer 3

Avoir volume exact

Question 4

Intro-Colonne de garde fait quoi + est composé de quoi

Answer 4

Éviter boucher colonne avec particules en suspension qui auraient pu rester dans l’échantillon
PS (phase stationnaire)= mm que colonne de chromato

Question 5

Intro-Pourquoi varier proportions d’éluants

Answer 5

Obtenir gradient de polarité le plus adapté à la situation

Question 6

Intro-Éluant = composé de quoi

Answer 6

Méthanol + acide acétique dilué

Question 7

Intro-Caractéristique principale pour être HPLC

Answer 7

Être sous pression

Question 8

Pas certaine de la pertinence so et je présume que c’est pas généralisé?
Intro- 400 PSI de plus que ce que dit le protocole, pourquoi

Answer 8

Changement colonne, PS plus fine = freine passage liquide

Question 9

Intro- Type détecteur

Answer 9

Détecteur UV-Vis

Question 10

Intro-Lambda analyse = quoi + pourquoi celle là (2)

Answer 10

275 nm
caféine absorbe le plus à cette longueur d’onde
1)compromis entre absorbance des 2 analytes
2)éviter interférence, car éluant absorbe pas à cette lambda

Question 11

Intro-Comment déterminer efficacité: nom du calcul (#1)+ provient de quelles données obtenues durant analyse (#2)

Answer 11

1)Résolution + nombre plateaux,
2) Distance entre les pics
Largeur des pics

Question 12

Théorie- concept global du HPLC pour la séparation

Answer 12

Différence affinité de certains composés à se séparer selon la PS et la PM

Question 13

Théorie- Quel type PS pour l’analyse?

Answer 13

C18 non polaire

Question 14

Théorie-HPLC en phase inverse veut dire quoi

Answer 14

PS= non polaire, C18
PM= polaire, acide acétique + méthanol

Truc pour inverse:
Tu es mince, tu vas aux States où le monde est gros, tu es à l’inverse de la population; la population = grosse =PS =gras=C18=non polaire

PM est polaire

Question 15

Théorie-En phase inverse, quels type (polaire ou non) sortent en premier et pourquoi

Answer 15

Composés polaire, car affinité avec PM

Question 16

Théorie-composés moins polaire sortent quand en phase inverse vs polaire et pourquoi

Answer 16

Plus loin, car affinité avec PS

Question 17

Intro- HPLC marque modèle

Answer 17

UltiMate 3000 de la compagnie Dionex (Thermo Scientific) avec pompe quaternaire

Question 18

Discussion-Gradient choisi

Answer 18

64% MeOH, 36% acide acétique

Question 19

Discussion-pourquoi caféine était la plus polaire

Answer 19

atome azote hétérocycles = protonés ds milieu acide (acide acétique)

Question 20

Discussion-Prend quoi comme valeur selon Skoog pour avoir une bonne résolution

Answer 20

Résolution= 1.5

Question 21

Discussion- définition du nombre de plateaux théoriques

Answer 21

Nombre d’interactions où il y a équilibre de l’analyte entre la PM et la PS (Skoog p.769), mais en réalité ça se passe pas, car l’éluant est en mouvement constant donc pas de vrai équilibre

Question 22

Discussion-Hauteur équivalente d’un plateau théorique + vient d’où

Answer 22

Vient du nombre plateaux théoriques

Égale valeur fictive de la distance entre les différents équilibres de analyte entre PS et PM (les plateaux théoriques)

Question 23

Discussion-à 275 nm, il se passe quoi pour l’absorptivité molaire caféine et AAS

Answer 23

Plus grande pour caféine et AAS plus faible, hypothèse, absorptivité molaire serait plus faible peut importe concentration et longueur d’onde. Faudrait checker la valeur attendue pour chacune.

Question 24

DiscussionAvantages HPLC avec pompe quaternaire(3)

Answer 24

1) faire gradient ds PM, optimiser séparation, car on a 4 pompes. Si 1 pompe, faudrait faire le mélange avant (dans une bouteille), une seule concentration possible.
2) requière petits volumes échantillons
3) temps opération moyennement court (mais dépend de la complexité de l’analyse et du nbr d’analytes-CFL)

Question 25

Discussion-Désavantages HPLC (2)

Answer 25

1) Échantillon va ds les déchets
,mais en théorie, c’est comme une colonne de silice, on pourrait récupérer les différents analytes en amenant le tuyau du déchet ds un bécher mettons)
2) conso élevée de solvants = $$$$$

Question 26

Discussion-Avantages de la boucle d’injection (3)

Answer 26

1) volume exact injecté ds la colonne
2) diminuer imprécision vs injection manuelle
3) signal réplicable

Question 27

Discussion-Pertinent utiliser étalon interne O/N et pourquoi

Answer 27

N, volume fixé

Question 28

Discussion- «Fronting», allure

Answer 28

pente raide + finit progressivement

Question 29

Discussion- «Fronting», pourquoi ça se passe (2)

Answer 29

1) Trop grande affinité entre analyte et PS = étalement

2) saturation de la colonne, trop grande concentration analyte

Question 30

Calcul- masse aas ds comprimé, formule générale

Answer 30

(masse AAS ds échantillon/masse échantillon prélevé ) * masse comprimé total

Question 31

Conclu-pourquoi pas avoir pris les autres ratios pour le gradient

Answer 31

compromis entre séparation des pics, étalement et temps de séparation (ou temps de rétention)

Question 32

Conclu-diminuer le fronting comment pour échantillon commercial

Answer 32

Dilué, car fronting peut venir de la saturation de la colonne

Question 33

Conclu-Amélioration pour les étalons, diminuer incertitude

Answer 33

Prendre un plus grand volume

= diminue incertitude sur les résultats calculés + erreur relative plus faible