Semaine 6: chromatographie sur colonne Flashcards
Que contient la colonne?
La phase stationnaire, qui consiste en une matrice, un gel, une résine.
Qu’est ce que l’éluat?
Liquide qui sort en bas de la colonne
Qu’est ce que le processus d’élution?
La substance est entrainée par la phase mobile au travers la phase stationnaire
Dans la chromatographie d’exclusion, qu’est ce qu’on utilise comme phase stationnaire? Comment ça fonctionne?
Gel formé de billes poreuses.
Selon la grosseur des molécules, certaines peuvent circuler à l’intérieur des pores, d’autres sont trop grosses.
Les grosses molécules sont exclues des pores, les petites sont inclues
Qu’arrivent-ils aux molécules de taille intermédiaire lors de la chromatographie d’exclusion?
sont partiellement incluses dans le gel et sont
donc éluées plus lentement que les grosses molécules, mais plus vite que les petites
molécules, qui elles, entrent facilement dans les billes poreuses et sont aisément
incluses dans le gel
La chromatographie d’exclusion sépare les molécules en fonction de ?
Leur taille et leur forme
Qu’est ce que le rayon de stokes?
Le rayon de Stokes décrit le poids moléculaire apparent d’une particule (le poids
d’une particule sphérique ayant la même vitesse d’élution par filtration sur gel).
Le rayon de Stokes d’un soluté est le rayon d’une sphère dure qui diffuse à la même
vitesse que ce soluté.
Qu’est ce que la limite d’exclusion?
Limite supérieure du domaine de frationnement: masse moléculaire au dela laquelle les molécules ne pénètrent plus dans le gel.
La séparation des molécules lors de la chromatographie par échange d’ions dépend de quoi?
Leur charge
Un échangeur anionique renferme et fixe quoi?
Renferme des charges positives, donc fixe des anions (-)
Un échangeur cationique renferme et fixe quoi?
Renferme des charges négatives, donc fixe des cations (+)
Qu’est ce que le pI
pH où la concentration de zwitterion est maximale
À quoi correspond le pI d’une protéine?
Au pH où la charge nette de cette protéine est nulle
Vrai ou faux? À un pH en dessous du pI, la protéine est chargée positivement, et au dessus, négativement
Vrai
La séparation lors de la chromatographie d’affinité dépend de quoi?
Les affinités qu’ont des molécules biologiques les unes pour les autres.
Quelle est la relation linéaire entre le volume d’élution d’un composé et sa MM? (Dans la chromatographie d’exclusion)
Vol d’élution = logMM
Quel est le critère de séparation de chromato d’exclusion?
Taille et forme des molécules
Quel est le critère de séparation de la chromato échangeuses d’ions?
Charge ionique
Quelle est le critère de séparation de la chromato d’affinité?
Structure des molécules
Que contient la phase stationnaire?
Matrice ,gel, résine
Qu’est ce que l’éluat?
solution recueillie au bas de la colonne
Qu’est ce que le domaine de fractionnement?
domaine de masses moléculaires pour lesquelles il y aura une séparation optimale selon la masse moléculaire
Le premier soluté élué a la taille la plus _
grande
La hauteur dans un graphique défini..
la concentration du soluté. un grand pic = une grande concentration
À quoi correspond le volume d’élution?
Volume d’éluant nécessaire pour éluer (faire sortir) une molécule en particulier
À quoi correspond le volume mort?
Volume d’élution d’une molécule dont la taille excède la limite d’exclusion du gel,
donc qui ne pénètre pas dans les billes
Si la taille de A > la limite d’exclusion, alors Ve de A = Vo
À quoi correspond le volume total?
volume d’élution d’une molécule qui diffuse totalement dans les billes, donc qui pénètre dans toutes les billes du gel
Si la taille de B < la limite inférieure du domaine de fractionnement, alors Ve de B = Vt
Laquelle des chromatographies implique une interaction spécifique réversible avec un ligand lié à la matrice ?
chromato d’affinité
Vrai ou faux? la chromato d’échange ionique est réversible
Vrai
Un échangeur anionique renferme des charges _ et fixe des _
renferme des charges positives et fixent des anions
Un échangeur cationique renferme des _ et fixe des
renferme des charges négatives et fixe des cations
Comment on calcule le pI
pI = (pk1 + pk2)/2
Applications de l’adsorption
tous
Applications du partage
tous
Applications de l’exclusion
tous sauf acides nucléiques
Applications de l’échangeuse d’ions
tous sauf lipides
