Semaine 10: Biologie moléculaire 1 Flashcards
Quelle est la différence entre un génome et un gène?
Génome: ensemble du matériel génétique d’un être vivant. Regroupe les séquences codantes et non codantes
Gène: Séquence codante pour une protéine ou un ARN
Combien de chromosome contiennent les bactéries ?
1 qui contient tous les gènes essentiels à la survie de l’organisme
Qu’est ce qu’un plasmide?
ADN extrachromosomique, beaucoup plus petit que les chromosomes. Portent des gènes non essentiels
Quelle est la différence entre un génotype et un phénotype?
Génotype: l’ensemble des gènes qui concernent le développement d’un attribut , ex:brun/bleu
Phénotype: ce qu’on observe ex: brun
De quoi est composé l’ADN?
Nucléotides
De quoi est fait un nucléotide?
Un sucre, une base azotée et 1-3 groupements phosphates
Quels sont les 4 différents nucléotides?
Adénine, cytosine, guanine et thymine
Qu’est ce qu’une base azotée?
molécules cycliques composées d’atomes de carbone et d’azote
Quels sont les deux types de bases azotées dans les acides nucléiques?
Pyrimidines et purines
Quelle sont les 3 principales pyrimidines?
Cytosine, thymine et uracile
Quelles sont les 2 principales purines?
Adénine et guanine
Où retrouve-t-on principalement l’uracile?
Dans l’ARN
Où retrouve-t-on la cytosine?
ADN et ARN
Où retrouve-t-on l’adénine et la guanine?
ADN et ARN
on lit et écrit une séquence d’ADN de l’extrémité _ vers l’extrémité _
5’ Phosphate à 3’ OH
Les brins formant la double hélice de l’ADN sont _ et _
antiparallèles: orientations opposées
et complémentaires: chaque purine sur un brin est associée à la pyrimidine correspondante sur l’autre brin
Chaque adénine (A) d’un brin est appariée à une _ sur l’autre brin via _ liens H
thymine, 2
chaque guanine (G) d’un brin est appariée à une _ sur l’autre brin via _ liens H.
cytosine, 3
Quelle est la différence entre l’expression homologue/hétérologue
Homologue: Implique l’expression d’un gène chez une espèce qui le possède naturellement (endogène)
Hétérologue: L’expression d’un gène chez un organisme qui NE le possède PAS naturellement (exogène).
vrai ou faux? les 2 brins de l’ADN sont identiques
Faux, ils sont antiparallèles et complémentaires
Quelle est la première étape lors du clonage?
couper l’ADN avec une endonucléase
Comment une enzyme de restriction coupe une séquence palindromique GAATTC?
Coupe le premier et le dernier
Qu’est ce qu’une extrémité cohésive ?
Une extrémité qui se termine par une portion simple brin
De quoi est formé un plasmide recombinant ?
Mélange du vecteur linéaire avec insert et ligase
À quoi sert le tampon qui contient le EDTA
EDTA est un inhibiteur de certaines nucléases qui pourraient entraîner la dégradation de l’ADN en cours d’isolement.
À quoi sert le SDS lors de l’extraction de plasmides?
solubilise les lipides des membranes et les fragilise. De plus, la présence de SDS dénature les protéines, ce qui les rend moins solubles
Que provoque l’ajout de NaOH?
séparation de la double hélice d’ADN
Lors de la Méthode d’extraction de plasmides par lyse alcaline, l’ADN plasmidique se trouve dans le surnageant ou précipité?
surnageant
Pourquoi on ajoute de l’éthanol dans le surnageant qui contient l’ADN plasmidique ?
car ils ne sont pas très solubles ensemble. L’ADN est très peu concentré, donc en les mélangeant l’ADN va précipiter
Pourquoi il ne faut pas utiliser le vortex ?
fait de la mousse, donc mauvais contact entre les composés du mélange
peut causer des bris mécaniques de l’ADN et dénaturer l’enzyme
Pour une électrophorèse, on utilise quel support pour de l’ADN ou des protéines?
ADN: agarose
Protéines: polyacrylamide
À quoi sert le tampon dans l’électrophorèse?
maintenir le pH
source d’électrolytes
Pourquoi la présence d’électrolytes est importante dans l’électrophorèse?
car l’eau pure n’est pas un bon conducteur d’électricité, donc les ions crée une conductibilité
Quand on diminue le pourcentage du polymère (du support), ça _ la taille des pores
augmente
Pour uniformiser la charge de l’ADN, le pH doit être a combien? pourquoi?
supérieur à 7
à ce pH les groupements phosphoryles ont tous une charge - peu importe la base azotée, donc le ratio charge/masse est constant
quel est le tampon utilisé pour les gels d’agarose? il maintient à quel pH
TAE 1X, pH 8
en ordre croissant lequel est plus rapide: adn linéaire, adn circulaire superenroulé, adn relaché
- superenroulé
- linéaire
- relaché
Pourquoi on préfère digérer l’ADN avant migration ?
pour que l’ADN soit linéaire, comme ça la migration est uniquement basée sur la taille (pas la forme)
Pourquoi les produits PCR n’ont pas besoin d’être digérés?
ils ont une seule forme (linéaire)
La méthode de coloration la plus fréquente pour les gels d’agarose est ?
bromure d’éthidium
Le bromure d’éthidium (la méthode de coloration pour gel d’aggarose) est un agent intercalant, ça signifie quoi?
il s’insère entre 2 base azotées à l’intérieur de la double hélice de l’ADN
deux dernières page biomol 3
À quoi sert l’origine de réplication?
essentielle à la réplication et au maintien du plasmide dans la cellule hôte
À quoi sert le marqueur de sélection?
permet d’isoler uniquement les bactéries qui ont
acquis l’ADN (généralement un gène de résistance à un antibiotique)
À quoi servent les sites reconnus par des enzymes de restrictions?
permettent de couper le
vecteur pour permettre l’insertion du gène d’intérêt
