Semaine 4: Spectrophotémétrie Flashcards
Qu’est ce que la spectrophotométrie?
Méthode analytique qui consiste à mesurer l’absorbance d’une substance pour déterminer sa concentration
Lors de la spectro, un flux _ de lumière traverse la _. Le spectro mesure le flux _ de lumière
incident, solution, émergent
Quels sont les deux types d’analyse que permet la spectro?
Quantitative et qualitative
Quelles sont les analyses quantitatives possibles avec la spectro?
Dosage d’une substance
Suivi des réactions chimiques
Quelles sont les analyses qualitatives possibles avec la spectro?
Identification des composés
Indicateur de pureté des solutions
Les UV comprennent des rayonnements dont la longueur d’onde varie entre _
100 nm et 388 nm
Qu’est ce que la longueur d’onde?
distance entre deux pics
d’onde
Qu’est ce que l’absorption?
lorsqu’un atome ou une molécule, après avoir été exposé à un rayonnement, absorbe une partie de l’énergie de celui-ci.
Qu’est ce que le spectre d’absorption?
Représentation graphique de l’absorbance d’un composé donné en fonction de la longueur d’onde λ.
Le spectre d’absorption permet donc l’analyse _ du composé
qualitative
Qu’est ce que le pic d’absorption?
longueur(s) d’onde λ pour laquelle/lesquelles on
observe un maximum d’absorption
Qu’est ce qu’un chromophore?
groupe d’atomes qui absorbe des radiations du visible
L’absorption sélective dépend de quoi?
la structure chimique de chaque molécule
Les molécules qui absorbent le visible et l’UV contiennent des __
Liaisons insaturées
Quelles sont les molécules qui contiennent des liaisons insaturées?
Liaison carbone-carbone double ou triple
Groupements chimiques spécifiques qui contiennent des doubles liaisons entre cardone/oxygène/azote
Purine et pyrimidine
Qu’est ce que la transmittance?
Mesure de la proportion de lumière qui traverse un corps absorbant
Quels sont les deux principes de la loi Beer-Lambert?
- Quand un faisceau traverse un milieu absorbant, son intensité décroit exponentiellement en fonction de l’augmentation de la concentration du milieu absorbant.
Plus une solution est concentrée, plus l’intensité de la lumière transmise diminue, plus cette diminution est marquée - Lorsqu’un faisceau traverse un milieu absorbant, son intensité décroit exponentiellement en fonction de la longueur du trajet parcouru.
Plus le trajet de la lumière est long, plus l’intensité de la lumière transmise diminue
Quelle est l’équation de beer-lambert et à quoi correspondent les variables?
A = e l c
A = Absorbance
e = coefficient d’absorption
l = longueur du trajet d’optique
c = concentration de la substance en solution
Quelle est l’équation pour obtenir la transmittance?
T = I/I0
I: émergent
I0: incident
Quelle est l’équation de l’A en fonction de la transmittance
A = -logT = -log(I/I0)
Le coefficient d’absorption est spécifique pour une _ et une _ données.
molécule et longueur d’onde
Coefficient d’absorption: e
Molaire.
Lorsque c = 1M et l = 1cm
Coefficient d’absorption E0,1%
Lorsque c =0,1% et l=1cm
c = 0,1g/100ml ou 1 mg/ml
Coefficient d’absorption E1%
Lorsque c 1%
c = 1g/100ml ou 10 mg/ml
Quelles sont les conditions de la loi Beer-Lambert
La lumière est monochromatique
La solution est homogène
Le soluté ne doit pas émettre de fluorescence
La conc de la solution ne doit pas être trop élevée
Quel serait le maximum de concentration de solution à respecter
ordre de 10^-4
Pourquoi on ne peut pas utiliser des grandes concentrations?
Extrapolation, la relation n’est plus linéaire donc ne suit plus la même équation
Vrai ou faux? Toutes les protéines ont le même coeff d’absorption
Faux
Pourquoi on utiliser l’A à 280 nm
En analysant le spectre d’absorption tu tryptophane et de la tyrosine (soit 2/3 des AA aromatiques) on voit un pic d’absorption à cette longueur d’onde
une protéine qui contient _ de résidus d’acides aminés aromatiques absorbera une _ portion du rayonnement.
plus, plus grande
Les acides nucléiques ont un pic à quelle longueur d’onde?
260 nm
Quel est le ratio 260/280 de l’ADN pur?
2 (divise l’A à 260 par celle à 280)
Si le ratio 260/280 est plus grand ou égal à _, il est biochimiquement utilisable
1,8
Quel est le principe du dosage de bradford?
le réactif se lie aux AA basiques et AA hydrophobes
Quel est le principe du dosage Biuret
le réactif réagit avec les liaisons peptidiques des protéines.
Entre le biuret et bradford, lequel a une sensibilité plus grande
biuret
Entre Bradfort et biuret, lequel est influencé par d’autres molécules
Biuret
Entre Bradford et Biuret, quel a une formation de complexe équivalent pour toutes les protéines
Biuret car réagit avec liens peptidiques
