Semaine 11: Biologie moléculaire 2

Question 1

Qu’est ce que la PCR?

Answer 1

méthode pour amplifier à partir d’une quantité infime d’acides nucléiques, un segment d’ADN particulier (séquence cible)

Question 2

Qu’est ce que la dénaturation de l’ADN?

Answer 2

2 brins de l’hélice d’ADN sont séparés par chauffage

Question 3

Qu’est ce que la renaturation de l’ADN?

Answer 3

Les 2 brins peuvent se réassocier quand la température redescend.

Question 4

Qu’est ce que l’ADN polymérase?

Answer 4

enzyme qui catalyse la synthèse d’un brin complémentaire à partir d’un ADN gabarit

Question 5

Pourquoi l’ADN polymérase est essentielle?

Answer 5

Car elle permet la réplication de l’ADN

Question 6

Dans quelle direction se fait la synthèse d’ADN par ADN polymérase?

Answer 6

5’ vers 3’

Question 7

Comment est initiée la réplication de l’ADN

Answer 7

L’ADN polymérase ajoute le nucléotide complémentaire à celui présent sur le brin gabarit

Question 8

Qu’est ce qu’une amorce?

Answer 8

La courte séquence d’ADN qui sert de point de départ pour la synthèse d’ADN

Question 9

Quelles sont les 5 étapes d’une réaction PCR

Answer 9

1. Dénaturation
2. Hybridation
3. Élongation
4. Répétition des étapes 1à3
5. Polissage

Question 10

Que permet l’étape d’hybridation lors d’une réaction PCR

Answer 10

permet l’appariement des amorces

Question 11

Que contient une réaction PCR?

Answer 11

ADN polymérase thermostable
Tampon
dNTPs
amorces
ADN gabarit
Eau

Question 12

Qu’est ce qui délimite la région qui sera amplifiée lors de la PCR

Answer 12

La position des amorces

Question 13

L’ADN amplifié par PCR est appelé _

Answer 13

amplicon

Question 14

Lors d’un PCR, les 2 amorces utilisées doivent avoir _

Answer 14

une longueur et une Temp de fusion similaire

Question 15

Quelle est la longueur des amorces pour un PCR?

Answer 15

entre 15 et 35 nucléotides

Question 16

Plus l’amorce est longue, plus l’hybridation est _

Answer 16

spécifique

Question 17

Qu’est ce que la température de fusion des amorces?

Answer 17

Temp à laquelle 50% des amorces sont associées à la matrice d’ADN

Question 18

Quelle est l’équation pour avoir le nombre total de copies lors de l’amplification?

Answer 18

Y = X * 2^n
Y: nombre total
X: nombre initial
n: nombre de cycles

Question 19

Quels sont les facteurs qui expliquent le plateau qu’atteint l’amplification? (ce qui explique pourquoi ça hit jamais 1 milliard de copies)

Answer 19

1. Les désoxyribonucléotides s’épuisent
   2.l’enzyme est inactivée par des passages successifs à haute température
2. les BRINS d’ADN qui ont été séparés en chauffant peuvent se RÉASSOCIER AVANT de se lier aux amorces.

Question 20

Qu’est ce qu’un polymorphisme génétique?

Answer 20

Les variations de séquence parmi les individus d’une population (qui représente
moins de 1% du génome)

Question 21

Qu’est ce qu’un SNP?

Answer 21

sorte de polymorphisme où 1 nucléotide est remplacé par un autre

Question 22

Quels sont les deux sortes de polymorphismes de répétition?

Answer 22

STR: formés par la répétition
d’un motif d’ADN long de 2 à 6 nt.
VNTR: motifs plus longs que les STR (16 à 25 nt)

Question 23

Dans le corps humain, les VNTR ou STR sont plus nombreux ?

Answer 23

STR

Question 24

relire à partir de p20

Question 25

Comment on calcule le tm?

Answer 25

2 fois le nombre de A et T + 4 fois le nombre de G et C

Question 26

Dans quel ordre on ajoute les réactif lors d’un pcr

Answer 26

1. eau (plus grand volume)
2. tampon, le MgSO4, les dNTP, l’amorce F et l’amorce R
3. ADN polymérase
4. ADN gabarit