Semaine 13 : Électrophorèse Flashcards
Qu’est ce que le principe d’électrophorèse?
Méthodes permettant de séparer les composantes d’un mélange en fonction de leur vitesse de migration dans un gel en présence d’un champ électrique
Quelles sont les caractéristiques qui influencent la migration d’une molécule?
Charge
Forme
Masse
Quelle est la différence entre l’électrophorèse PAGE et SDS PAGE
PAGE: Électrophorèse sur gel d’acrylamide en conditions natives
SDS PAGE: Électrophorèse sur gel d’acrylamide en conditions dénaturantes
Qu’est ce qui permet à l’acrylamide de se lier?
Ajout de bis acrylamide, agent réticulant
Les radicaux libres nécessaires à la polymérisation du gel de polyacrymalide viennent de quoi?
persulfate de sodium
Quel est le catalyseur utiliser pour la réaction de polymérisation de l’acrylamide?
TEMED
La taille des pores formés par la polymérisation dépend de quoi?
% total d’acrylamide et bis-acrylamide, et leur proportion
Plus le % d’acrylamide est élevé, plus le gel peut séparer des mol de petites tailles
Vrai ou faux? pour déterminer la masse moléculaire et la focalisation isoélectrique, il faut utiliser le PAGE
faux, sds PAGE
Qu’est ce que le pI ?
pH pour lequel la somme des charges + et – d’une protéine
s’annule : la charge nette est nulle
Quand le pH est plus petit que pI, la protéine est chargée _
positivement (donc plus acide)
Quand le pH est plus grand que pI, la protéine est chargée _
négativement (donc plus basique)
Vrai ou faux? Lors d’un PAGE les protéines changent de conformation
faux elle gardent leur conformation native
Le SDS PAGE sépare selon quoi?
masse molaire uniquement
Que permet le SDS PAGE
déterminer la masse moléculaire,
le nombre de sous unités d’une prot,
la pureté
Que signifie la dénaturation d’une protéine?
Perte de la conformation native après la bris des interactions non covalentes et des ponts disulfures
Vrai ou faux? la dénaturation détruit les liens peptidiques
faux
Quelle est la première étape lors du SDS PAGE
chauffer les échantillons pour briser les interactions faibles
Que permet le SDS ? (le produit)
bris des interactions non covalentes
Que permet l’agent réducteur lors du SDS PAGE
détruit les ponts disulfure
Que permet la présence de SDS dans le tampon?
s’assurer que les prot demeurent dénaturées
Que provoque le SDS lorsqu’il se fixe aux protéines?
dépliement des structures secondaires et tertiaires en brisant les liens non covalents.
elles entourent la protéine dépliée pour empecher la dénaturation
Comment sont chargées les protéines dénaturées par le SDS?
négativement
Les molécules de SDS sont chargées _
négativement
Quel est l’agent réducteur le plus utilisé pour le SDS PAGE et que fait-il?
β-mercaptoéthanol
détruit les ponts disulfures
Les ponts disulfures que brisent l’agent réducteur sont intrapeptide ou interpeptide?
peut être les deux
Qu’est ce qu’un système continu/discontinu?
Continu: un seul gel de polyacrylamide
Discontinu: superposition de deux gels. un de concentration ou empilement, et un de résolution ou séparation
Dans un système discontinu de SDS PAGE, les deux gels doivent différer sur deux points:
- la conc de polyacrylamide est différente
- les gels sont préparés dans des tampons Tris-HCl de pH différents
Que permet le gel d’empilement (de concentration)
Permet aux prot d’arriver en même temps au gel de séparation. Sans lui, les prot formeraient des bandes larges et difuses
Que permet le gel de séparation?
séparer les prot selon leur taille, en fonction de leur vitesse de migration
finir les 4 dernières diapos
que permet le β-mercaptoéthanol
détruit les ponts disulfure
