Semaine 13 : Électrophorèse

Question 1

Qu’est ce que le principe d’électrophorèse?

Answer 1

Méthodes permettant de séparer les composantes d’un mélange en fonction de leur vitesse de migration dans un gel en présence d’un champ électrique

Question 2

Quelles sont les caractéristiques qui influencent la migration d’une molécule?

Answer 2

Charge
Forme
Masse

Question 3

Quelle est la différence entre l’électrophorèse PAGE et SDS PAGE

Answer 3

PAGE: Électrophorèse sur gel d’acrylamide en conditions natives
SDS PAGE: Électrophorèse sur gel d’acrylamide en conditions dénaturantes

Question 4

Qu’est ce qui permet à l’acrylamide de se lier?

Answer 4

Ajout de bis acrylamide, agent réticulant

Question 5

Les radicaux libres nécessaires à la polymérisation du gel de polyacrymalide viennent de quoi?

Answer 5

persulfate de sodium

Question 6

Quel est le catalyseur utiliser pour la réaction de polymérisation de l’acrylamide?

Answer 6

TEMED

Question 7

La taille des pores formés par la polymérisation dépend de quoi?

Answer 7

% total d’acrylamide et bis-acrylamide, et leur proportion
Plus le % d’acrylamide est élevé, plus le gel peut séparer des mol de petites tailles

Question 8

Vrai ou faux? pour déterminer la masse moléculaire et la focalisation isoélectrique, il faut utiliser le PAGE

Answer 8

faux, sds PAGE

Question 9

Qu’est ce que le pI ?

Answer 9

pH pour lequel la somme des charges + et – d’une protéine
s’annule : la charge nette est nulle

Question 10

Quand le pH est plus petit que pI, la protéine est chargée _

Answer 10

positivement (donc plus acide)

Question 11

Quand le pH est plus grand que pI, la protéine est chargée _

Answer 11

négativement (donc plus basique)

Question 12

Vrai ou faux? Lors d’un PAGE les protéines changent de conformation

Answer 12

faux elle gardent leur conformation native

Question 13

Le SDS PAGE sépare selon quoi?

Answer 13

masse molaire uniquement

Question 14

Que permet le SDS PAGE

Answer 14

déterminer la masse moléculaire,
le nombre de sous unités d’une prot,
la pureté

Question 15

Que signifie la dénaturation d’une protéine?

Answer 15

Perte de la conformation native après la bris des interactions non covalentes et des ponts disulfures

Question 16

Vrai ou faux? la dénaturation détruit les liens peptidiques

Answer 16

faux

Question 17

Quelle est la première étape lors du SDS PAGE

Answer 17

chauffer les échantillons pour briser les interactions faibles

Question 18

Que permet le SDS ? (le produit)

Answer 18

bris des interactions non covalentes

Question 19

Que permet l’agent réducteur lors du SDS PAGE

Answer 19

détruit les ponts disulfure

Question 20

Que permet la présence de SDS dans le tampon?

Answer 20

s’assurer que les prot demeurent dénaturées

Question 21

Que provoque le SDS lorsqu’il se fixe aux protéines?

Answer 21

dépliement des structures secondaires et tertiaires en brisant les liens non covalents.
elles entourent la protéine dépliée pour empecher la dénaturation

Question 22

Comment sont chargées les protéines dénaturées par le SDS?

Answer 22

négativement

Question 23

Les molécules de SDS sont chargées _

Answer 23

négativement

Question 24

Quel est l’agent réducteur le plus utilisé pour le SDS PAGE et que fait-il?

Answer 24

β-mercaptoéthanol
détruit les ponts disulfures

Question 25

Les ponts disulfures que brisent l’agent réducteur sont intrapeptide ou interpeptide?

Answer 25

peut être les deux

Question 26

Qu’est ce qu’un système continu/discontinu?

Answer 26

Continu: un seul gel de polyacrylamide
Discontinu: superposition de deux gels. un de concentration ou empilement, et un de résolution ou séparation

Question 27

Dans un système discontinu de SDS PAGE, les deux gels doivent différer sur deux points:

Answer 27

1. la conc de polyacrylamide est différente
2. les gels sont préparés dans des tampons Tris-HCl de pH différents

Question 28

Que permet le gel d’empilement (de concentration)

Answer 28

Permet aux prot d’arriver en même temps au gel de séparation. Sans lui, les prot formeraient des bandes larges et difuses

Question 29

Que permet le gel de séparation?

Answer 29

séparer les prot selon leur taille, en fonction de leur vitesse de migration

Question 30

finir les 4 dernières diapos

Question 31

que permet le β-mercaptoéthanol

Answer 31

détruit les ponts disulfure