semaine 10 Flashcards
que sont les études d’association avec un marqueur polymomorphe ?
Les pangénomique ?
= association d’une maladie polymorphe avec maladie
ou condition
=Étude d’association pour un seul SNP
On constate maladie polymorphe sera en plus grande quantité chez des patents atteints d’une maladie
que sont les études d’association pangénomique
Comment on l’étudie
Eude d’association pour plusieurs SNP
On faits graphique de manathan qui rpz les dif chromosomes. Ceux qui se distinguent sont des SNP qui montre une
association avec la maladie
quelle est la “fail” des études pangénomiques
pourquoi
On connait très mal les rôles et les fonctions
car l’augmentation de risque pour le SNP
est de 1,05
environ
Ce n’est pas surprenant : c’est difficile d’étudier
comment un facteur (SNP) agit pour augmenter le
risque d’attraper une maladie de 5 % seulement…
Quelle est la grosse différence entre
mutations mendéliennes sont rares à pénétrance
élevée
SNP fréquents à pénétrance très faible identifiés
par GWAS
comment appelle-ton culture les cellules de
mammifères isolées directement d’un animal
on parle de cellules en culture primaire
ou de cellules primaires
Est ce que les cellules humaines sont immortelles ? que cela signifie si elles le sont ?
Non
qu’une lignée cellulaire humaine est devenue immortelle en culture de façon spontanée il faudra plutôt penser qu’elle est un contaminant …comme le cellules HeLa par exemple !
Comment rendre une cellules humaine immortelle
Virus
adenovirus, SV40
Par exemple le virus d’Epstein-Barr peut
immortaliser les lymphocytes B en culture
Qu’est ce que la fusion cellulaire ?
On peut considérer la fusion cellulaire
comme le transfert du génome entier
d’une cellule à une autre
qu,est ce qui peut provoquer une fusion de noyau ?
La fusion peut être provoquée
soit par le virus de Sendai
soit par le polyéthylène glycol
(PEG)
À quoi ça sert d’obtenir des
cellules hybrides ?
À l’époque cela a permis de placer les gènes humains sur leurs chromosomes (nous n’en parlerons pas) La fusion cellulaire permet aussi d’effectuer des tests de complémentation avec cellules de mammifères
Comment obtenir des anticorps monoclonaux ? que sont ils ?
L’obtention des anticorps monoclonaux passe par la fusion de cellules de myélome de souris (immortelles) et cellules de la rate (productrices d’anticorps) → hybridomes
disons seulement que ce sont des anticorps qui sont beaucoup utilisés comme outils en recherche et en clinique
Que signifie transfection
Le terme transfection est utilisé chez les cellules eucaryotes pour décrire le processus appelé transformation chez les bactéries C’est-à-dire que l’ADN nu pénètre dans la cellule cible
Que sont les différentes méthodes pour pour faire pénétrer l’ADN nu à l’intérieur des
cellules de mammifères
coprécipitation au phosphate de calcium
• électroporation
• lipofection
A quoi servent les vecteurs d’expression
Les vecteurs d’expression servent à assurer la transcription et la traduction des séquences codantes dans les cellules de mammifères
quel est le rôle de Ori dans le plasmide
A quoi sert les gènes de résistance
Ori ColE1 sert comme origine de replication
du plasmide chez E. coli
permet la sélection du plasmide chez E. coli
C’est dans E. coli qu’on fait répliquer le
plasmide
pour en avoir en grande quantité
comment avoir une expression stable d’un ADNc? pourquoi est elle défini de stable
Afin d’obtenir l’expression stable d’un ADNc
on peut cloner l’ADNc et le gène neo
dans un même plasmide
et sélectionner des transfectants stables en
présence de G418
Ces cellules vont synthétiser la protéine codée
par le gène ou ADNc d’intérêt dans le vecteur
d’expression
Et dans ce cas l’expression sera maintenue
dans le temps
Pour cette raison elle est dite stable
Quelles sont les différence entre l’expression stable et transtitoire
Expression stable
sélection obligatoire
- délai de 2 à 3 semaines
- l’ADN s’intègre
Expression transitoire
-aucune sélection nécessaire
délai de 24 ou 48 heures
- l’ADN demeure extrachromosomique
Quand l’ADN s’intège, le fait il de manière aléatoire ou précise
L’intégration de l’ADN étranger au
génome de la cellule transfectée se
fait de façon aléatoire
n’importe quel séquence d’ADN qui se
trouve à l’intérieur du noyau
va s’intégrer au génome de façon aléatoire
(message à retenir !!)
Que sont les raison de fairre des transfections
régulatrices de la transcription
• pour vérifier l’activité biologique de la protéine
codée par un ADNc cloné
• pour étudier à l’intérieur de cellules le
mécanisme d’action d’une protéine quelconque
donnez un exemple de transfection pour • pour vérifier l’activité biologique de la protéine
codée par un ADNc cloné
LDL
Des clones positifs avec les deux sondes
ont été retenus
obtenir l’ADNc humain
Comment peut-on confirmer que
l’ADNc cloné code vraiment pour le
récepteur des LDL ?
Transfection pour vérifier l’activité
biologique de la protéine codée par
un ADNc cloné
cellules sans LDL dans lesquelles il ya eu transfection de vecteurs
recepteurs sont survenues
Cette expérience confirme que l’ADNc cloné
confère
lorsque exprimé
l’activité biologique des récepteurs des LDL
C’est-à-dire :
il code pour le récepteur des LDL
Pourquoi on pense que que le mécanisme de la
régulation du cycle cellulaire est conservé entre
S. pombe et l’humain
Un homologue humain du gène cdc2 de a été cloné
par l’expression d’une banque d’ADNc humain chez
S. pombe en sélectionnant pour des clones pouvant
restaurer le phénotype sauvage à un mutant cdc2
La séquence peptidique de la protéine humaine est
très similaire à celle de S. pombe
Quelle est l’autre méthod epour arriver à
incorporer l’ADN dans le génome de
cellules cibles
On se sert de lentivirus transducteurs
dérivés du rétrovirus HIV
Pourquoi les lentivirus
transducteurs infectent toutes sortes de cellules
La glycoprotéine de surface des lentivirus
transducteurs est remplacé par celle du
virus de la stomatite vésiculaire (VSV)
ce qui confère sur les lentivirus transducteurs la
spécificité d’infection de VSV
Or, VSV se fixe sur le bien connu (de vous !!)
récepteur des LDL – un récepteur ubiquitaire –
Quelle est la fonction des lentivirus ? comment ça fonctionne ?
les lentivirus transducteurs fournissent une autre méthode (que la transformation) pour faire pénétrer l’ADN étranger dans des cellules en culture Cette pénétration se fait par endocytose par l’intermédiaire récepteur des LDL (« receptor-mediated endocytosis »)
