Seance 8 Experience 2 Flashcards
Techniques utilisées pour la détection rapide et le titrage de certains antigènes, et aussi pour leur localisation intracellulaire. (2)
1) L’immunofluorescence
2) l’immunoperoxydase
Technique qui utilise un anticorps sur lequel a été fixé un fluorochrome sans altération du site de réaction de l’anticorps.
l’immunofluorescence
Substance qui, soumises à une source lumineuse, émettent une lumière de longueur d’onde supérieur à celle qui les avait excitées.
Fluorochromes
Les deux produits fluorescent les plus souvent employés
1) FITC: Isothiocyanate de fluorescéine
2) FITR: Isothiocyanate de rhodamine
(fluorescence rouge)
(fluorescence verte)
Qu’est-ce que l’immunofluorescence directe:
Faire réagir directement l’anticorps conjugué au fluorochrome avec l’antigène étudié.
L’anticorps qui détecte la protéine d’intérêt va être directement couplé à une molécule fluorescente.
L’immunofluorescence directe et indirecte peuvent être détecté sous quel type de microscope?
à fluorescence
Qu’est-ce que l’immunofluorescence indirecte?
Fixer dans un premier temps un anticorps non marqué sur les structures étudiées, puis révéler cette fixation par l’addition d’un sérum anti-immunoglobuline xénogénique fluorescent.
L’anticorps qui détecte la protéine d’intérêt n’est pas directement couplé à une molécule fluorescente. Cette dernière est couplé à un deuxième anticorps qui détectera le premier anticorps.
On utilise un anticorps conjugué à une enzyme, la peroxydase de raifort. On peut faire réagir par la méthode directe ou la méthode indirecte. Dans les deux cas, on localise le conjugué par une réaction caractéristique de l’enzyme, en ajoutant le sucstrat approprié. La réduction du peroxyde par la peroxydase est mise en évidence par un donneur d’hydrogène qui peut être visualisé ou mesuré après son oxydation.
L’Immunoperoxydase
Quels sont les critères pour le choix de l’enzymes pour les techniques d’immunoenzymatiques?
1) doit pouvoir révélée sans modifier la structure cellulaire
2) son activité spécifique doit être élevée
3) doit être stable à la température du laboratoire.
En plus de la peroxydase, quels sont d’autres enzymes souvent utilisées:
1) la phosphatase alcaline d’Escherichia coli
2) la glucose oxydase d’Aspergillus niger
Quel coloration a été utilisé ici et sur quelles cellules et virus?
Immunofluorescence sur cellules VERO infecté avec Herpesvirus
Quel coloration a été utilisé ici et sur quelles cellules et virus?
Immunoperoxydase sur cellules WI-38 infecté avec Cytomegalovirus
Quel coloration a été utilisé ici et sur quelles cellules et virus?
Immunoperoxydase sur cellules WI-38 infecté avec Cytomegalovirus. La cellule infecté est beaucoup plus coloré car elle produit la protéine d’intérêt en très grande quantité, surtout concentré dans l’inclusion cytoplasmique à côté du noyau en forme de rein.
Quel est l’avantage d’utiliser des technique immunoenzymatiques à la place de technique immunofluorescentes?
Les techniques immunoenzymatique ont l’avantage d’être plus simple à utiliser sur des coupes de tissus que l’immunofluorescence.
