Seance 6 Flashcards
Quels sont les deux modèles expérimentaux permettant l’isolement, la multiplication et éventuellement le titrage des virus animaux?
1) l’inoculation à l’animal
2) l’inoculation aux cultures cellulaires
Que provoque l’inoculation du virus à un animal vivant?
Peut provoquer soit une lésion caractéristique, soit une maladie, qui sont alors transmissibles en série, ce qui veut dire qu’elles correspondent à une multiplication de l’agent infectieux.
Quel virus donne des lésions pustuleuses sur la peau de la vache, de l’homme ou du lapin?
La vaccine
Quel virus, lorsqu’inoculé par voie intracérébrale au lapin, détermine une encéphalite mortelle?
Le virus de la rage
Quel virus, lorsqu’inoculé par voie intracérébrale chez certains singes, s’y multiplie en provoquant un syndrome paralytique souvent mortel?
Le virus de la polio
Quel virus, déposé sur la cornée scarifiée du lapin, y déclenche une kératite aiguë?
Le virus de l’herpès
Quel virus, introduit dans les fosses nasales du furet, se multiplie dans ses voies respiratoires supérieures et engendre une maladie fébrile qui, le plus souvent, n’entraînent pas la mort?
Le virus de la grippe
Quel virus, inoculé aux souriceaux nouveau-nés, s’y développe en entraînant des paralysies rapidement mortelles, mais que chez l’adulte, au contraire, fait seulement une infection inapparente?
Le virus coxsackie
Quelle est la méthode d’inoculation la plus ancienne?
L’inoculation à l’animal
Qu’est-ce qui fait qu’un embryon de poulet est un bon modèle d’inoculation?
C’est un animal stérile, peu encombrant et bon marché.
(et il n’a pas de système immunitaire)
Quels organes annexes de l’embryon de poulet apparaissant au cours de son développement ont des cellules qui sont sensibles à certains types de virus?
1) la membrane chorio-allantoïdienne
2) le sac amniotique
Quelles sont les 3 voies d’inoculations de l’embryon de poulet?
1) Inoculation de la membrane chorio-allantoïdienne
2) Inoculation des cavités allantoïdes et amniotique
3) Inoculation du sac vitellin
En quoi est-ce que l’inoculation aux cultures cellulaires simplifie de beaucoup l’isolement et la multiplication des virus animaux?
Même si ces cultures demandent des millieux nutritifs complexes et des conditions d’incubation adéquates, elles sont relativement simples à faire.
Quels sont les différents phénomènes qui peuvent avoir lieu lorsque les virus sont mis en contact avec des cellules?
1) certaines cellules se montrent réfractaires
2) la réplication du virus a lieu sans effet apparent sur la cellule
3) il peut y avoir destruction plus ou moins complète de la culture cellulaire, altération plus ou moins profonde de la morphologie cellulaire, ou modification de certaines propriétés cellulaires.
Exemples de virus dont on ne dispose toujours pas de systèmes de culture cellulaire adéquate? (2)
1) Rotavirus
2) Papillomavirus
Quelle morphologie auront les cellules d’une culture infectée par la polio?
Cellules arrondies, réfringentes, à cytoplasmes granuleux et noyau pycnotique.
Les cellules se séparent de leurs voisines, prennent un aspect rétracté, et finalement se détachent de la paroi et sont lysées.
Comment peut-on obtenir des plages de lyse analogues à celles observées avec les bactériophages mais avec une culture cellulaire animale et le virus de la polio?
En recouvrant les cellules infectées d’un millieu semi-solide (agarose), ce qui limite ainsi la dispersion du virus.
Quels sont les deux méthodes de titrage possible des virus de mammifères?
1) Énumération de plages de lyse en recouvrant d’agarose une culture nouvellement infectée.
2) En faisant une série de dilution afin de trouver la dilution maximale permettant d’obtenir la lyse cellulaire.
Le titre de la suspension virale est _1_ de la dilution maximale permettant d’obtenir la lyse cellulaire.
1) l’inverse
Le titrage est la mesure de quoi?
le nombre de particules INFECTIEUSES et non le nombre total de particules.
Le PCR est-il une méthode de titrage de virus? Pourquoi?
NON, il est possible de quantifier la quantité total de génome viral par PCR mais il est impossible d’en quantifier le titre infectieux.
Qu’est-ce qu’une dilution limite?
La dilution limite est la dilution à laquelle 1 culture cellulaire sur 2 sera infecté par une seule particule virale infectieuse détruisant la culture entière et l’autre culture ne sera pas infecté du tout.
Quel calcul est utilisé lors de la dilution limite et comment est-il calculé?
DICT50: Dose Infectieuse 50% en Culture de Tissus
A-50%
A-B
où A: % de puits totaux infectés dans une dilutions où
plus de 50% des puits sont infectés
B: % de puits totaux infectés dans une dilutions où
moins de 50% des puits sont infectés
décimale * log10 du facteur de dilution
(dilution décimale = 10, log10 10 = 1)
(dilution binaire = 2, log10 2 = 0,3)
= décimale: y.
L’inverse de l’exposant de la dilution A + la décimale y:
A-z⇒ Az+y⇒ A<span>x</span>
Si le volume inoculé est moins de 1mL, il faut ramener Ax / volume inoculé à Ax/1 mL:
Ax/0,25mL ⇒ Ax * 4 ⇒ Ax/1mL
Selon la distribution de poisson, il faut multiplier par 0,7 pour arriver à une estimation statistique plus valable.
(Ax/1mL * 0,7) = est la DICT50.
Comment peut-on augmenter la précision du calcul DICT50?
1) En augmentant le nombre de puits
2) En faisant des dilutions binaires au lieu de décimales
