Seance 10 Theorie 1 Flashcards
Quelle épaisseur doivent avoir les cellules ou tissus préparés pour observation en microscopie électronique à transmission?
500 Å d’épaisseur
Quelles sont les différentes étapes de préparation des spécimens pour la microscopie électronique?
1) Fixation
2) Déshydratation
3) Inclusion
4) Colorations
Qu’est-ce que la fixation?
Le but de la fixation est de stopper la vie cellulaire en gardant en place, et au mieux, ses constituants et en assurant une certaine rigidité aux structures.
Maybe a second question about how it’s done, but unsure if it will be necessary
we’ll see
Qu’est-ce que la déshydratation
L’eau est retirée des cellules au cours de passages successifs dans des bains d’alcool et de solvants organiques de plus en plus concentré.
Qu’est-ce que l’inclusion?
Technique par laquelle on finit par remplacer l’alcool et le solvant organique par le milieu d’enrobage/d’inclusion. La solidification du millieu d’inclusion s’effectue par polymérisation et la dureté est contrôlable et adaptée au type de tissus analysé
Qu’est-ce que la coloration?
Les même principes s’appliquent en microscopie électronique qu’en optique: pour augmenter le contraste et révéler les détails on peut procéder à diverses colorations cytochimiques généralement à base de métaux lourds.
À quelle autre imagerie est-ce que la microscopie électronique peut-elle servir, autre que des cellules en culture ou de tissu?
Elle peut également servir à mettre en évidence les particules virales dans des échantillons animaux divers (par exemple les matières fécales) ou dans l’environnement (par exemple dans l’eau).
Cette détection directe est spécialement utilisée lorsque les virus se épliquent difficilement en culture de cellules.
Comment procède-t-on afin de visualiser les reliefs de surface de la structure plus détaillée de la capside virale?
On procède généralement à une coloration négative à l’aide de métaux lourds (les aspérités se détacheront ainsi de manière claire sur fond sombre)
Nommez les sections du microscope électronique
Chambre d’émission
Canon d’électrons
Premier condenseur
Deuxième condensur
Objectif
Échantillon
Lentille de diffraction
Lentille intermédiaire
Projecteur
Camera 35mm
Écran
Camera
Qu’est-ce qu’a permis le développement du microscope électronique du point de vue viral?
De voir les virus pour la première fois
Quels sont les 2 avantages du microscope à transmission électronique?
- Fort grossissement
- Haute résolution
Quels sont les 2 inconvénients des microscopes à transmissions électroniques?
- Nécessite des échantillons très minces afin que les électrons traverse l’échantillon
- Nécessite que l’échantillon sois sous vide afin d’éviter que lse faisceaux d’électrons ne soient déviés par les molécules de l’air.
Quelles applications sont possibles avec le microscope électronique au niveau des particules virales seules?
- Leur détection hors de cultures cellulaires
- Leur quantification par l’utilisation de billes de latex et de calculs statistiques.
- L’examen de leur structure
Quelles applications sont possibles avec le microscope électronique au niveau des cellules infectées?
- L’examen de l’assemblage des particules virales au sein des cellules infectées
- L’ummunodétection au niveau ultrastructurel de protéines virales
Comment “voit-on” les particules virales au microscope électronique?
Par la coloration négative par l’entremise de métaux lourds qui vont “soupoudrer” les particules différemment dépendant de la structure, comme la neige sur une roche. La coloration est dite négative car les métaux lourds apparaitront noir et le blanc étant le manque de métaux lourds.
Comment “voit-on” les particules virales dans des cellules infectées au microscope électronique? (5)
La préparation est très différente que pour les particules virales hors d’une cellule:
1) Fixation
2) Déshydratation
3) Enrobage
4) Coupe
5) Coloration
Qu’implique l’étape de la “fixation” des cellules infectées?
Après avoir été détaché de leur support, les cellules sont fixé:
Elles sont traités avec un agent chimique qui va faire des ponts intermoléculaires entre les protéines ce qui va faire que la cellule va être rigide et va rester intact et ne se brisera pas durant les étapes subséquentes.
Qu’implie l’étape de la déshydratation?
Les cellules sont alors soumises à des bains de solvants organiques de concentrations croissante, soit 50% eau/méthanol jusqu’à 100% méthanol, puis 50% méthanol/acétone jusqu’à 100% acétone, et ainsi de suite jusqu’à la ce qu’il n’y ait plus d’eau dans la cellule. Ceci évite d’endommager la cellule lors de la déshydratation
Qu’implique l’étape de l’enrobage?
Les cellules sont enrobées dans une résine rappelant l’époxy qui durcira et permettra la coupe des cellules
Qu’implique l’étape de la coupe?
La coupe est fait à l’ultramicrotome
Qu’implique l’étape de la coloration?
Les coupes ultra mince sont coloré avec des métaux lourds afin de créer un contraste lors de leur exposition aux faisceaux d’électron du microscope électronique.
Pour quoi le prix Nobel de chimie a été octroyé en 2017?
CRUO-EM et TOMOGRAPHIE
Qu’est-ce que le CRYO-EM?
La création d’un disque vitrifié contenant des particules virale au moyen d’un mesh et d’azote liquide
Qu’est-ce que la TOMOGRAPHIE?
L’utilisation d’un logiciel permettant d’analyser le positionnement de plusieurs virions de même structure, mais d’orientation différentes et d’en créer une image haute résolution en 3 dimensions.
