Seance 10 Theorie 1

Question 1

Quelle épaisseur doivent avoir les cellules ou tissus préparés pour observation en microscopie électronique à transmission?

Answer 1

500 Å d’épaisseur

Question 2

Quelles sont les différentes étapes de préparation des spécimens pour la microscopie électronique?

Answer 2

1) Fixation
2) Déshydratation
3) Inclusion
4) Colorations

Question 3

Qu’est-ce que la fixation?

Answer 3

Le but de la fixation est de stopper la vie cellulaire en gardant en place, et au mieux, ses constituants et en assurant une certaine rigidité aux structures.

Question 4

Maybe a second question about how it’s done, but unsure if it will be necessary

Answer 4

we’ll see

Question 5

Qu’est-ce que la déshydratation

Answer 5

L’eau est retirée des cellules au cours de passages successifs dans des bains d’alcool et de solvants organiques de plus en plus concentré.

Question 6

Qu’est-ce que l’inclusion?

Answer 6

Technique par laquelle on finit par remplacer l’alcool et le solvant organique par le milieu d’enrobage/d’inclusion. La solidification du millieu d’inclusion s’effectue par polymérisation et la dureté est contrôlable et adaptée au type de tissus analysé

Question 7

Qu’est-ce que la coloration?

Answer 7

Les même principes s’appliquent en microscopie électronique qu’en optique: pour augmenter le contraste et révéler les détails on peut procéder à diverses colorations cytochimiques généralement à base de métaux lourds.

Question 8

À quelle autre imagerie est-ce que la microscopie électronique peut-elle servir, autre que des cellules en culture ou de tissu?

Answer 8

Elle peut également servir à mettre en évidence les particules virales dans des échantillons animaux divers (par exemple les matières fécales) ou dans l’environnement (par exemple dans l’eau).

Cette détection directe est spécialement utilisée lorsque les virus se épliquent difficilement en culture de cellules.

Question 9

Comment procède-t-on afin de visualiser les reliefs de surface de la structure plus détaillée de la capside virale?

Answer 9

On procède généralement à une coloration négative à l’aide de métaux lourds (les aspérités se détacheront ainsi de manière claire sur fond sombre)

Question 10

Nommez les sections du microscope électronique

Answer 10

Chambre d’émission

Canon d’électrons

Premier condenseur

Deuxième condensur

Objectif

Échantillon

Lentille de diffraction

Lentille intermédiaire

Projecteur

Camera 35mm

Écran

Camera

Question 11

Qu’est-ce qu’a permis le développement du microscope électronique du point de vue viral?

Answer 11

De voir les virus pour la première fois

Question 12

Quels sont les 2 avantages du microscope à transmission électronique?

Answer 12

1. Fort grossissement
2. Haute résolution

Question 13

Quels sont les 2 inconvénients des microscopes à transmissions électroniques?

Answer 13

1. Nécessite des échantillons très minces afin que les électrons traverse l’échantillon
2. Nécessite que l’échantillon sois sous vide afin d’éviter que lse faisceaux d’électrons ne soient déviés par les molécules de l’air.

Question 14

Quelles applications sont possibles avec le microscope électronique au niveau des particules virales seules?

Answer 14

1. Leur détection hors de cultures cellulaires
2. Leur quantification par l’utilisation de billes de latex et de calculs statistiques.
3. L’examen de leur structure

Question 15

Quelles applications sont possibles avec le microscope électronique au niveau des cellules infectées?

Answer 15

1. L’examen de l’assemblage des particules virales au sein des cellules infectées
2. L’ummunodétection au niveau ultrastructurel de protéines virales

Question 16

Comment “voit-on” les particules virales au microscope électronique?

Answer 16

Par la coloration négative par l’entremise de métaux lourds qui vont “soupoudrer” les particules différemment dépendant de la structure, comme la neige sur une roche. La coloration est dite négative car les métaux lourds apparaitront noir et le blanc étant le manque de métaux lourds.

Question 17

Comment “voit-on” les particules virales dans des cellules infectées au microscope électronique? (5)

Answer 17

La préparation est très différente que pour les particules virales hors d’une cellule:

1) Fixation
2) Déshydratation
3) Enrobage
4) Coupe
5) Coloration

Question 18

Qu’implique l’étape de la “fixation” des cellules infectées?

Answer 18

Après avoir été détaché de leur support, les cellules sont fixé:

Elles sont traités avec un agent chimique qui va faire des ponts intermoléculaires entre les protéines ce qui va faire que la cellule va être rigide et va rester intact et ne se brisera pas durant les étapes subséquentes.

Question 19

Qu’implie l’étape de la déshydratation?

Answer 19

Les cellules sont alors soumises à des bains de solvants organiques de concentrations croissante, soit 50% eau/méthanol jusqu’à 100% méthanol, puis 50% méthanol/acétone jusqu’à 100% acétone, et ainsi de suite jusqu’à la ce qu’il n’y ait plus d’eau dans la cellule. Ceci évite d’endommager la cellule lors de la déshydratation

Question 20

Qu’implique l’étape de l’enrobage?

Answer 20

Les cellules sont enrobées dans une résine rappelant l’époxy qui durcira et permettra la coupe des cellules

Question 21

Qu’implique l’étape de la coupe?

Answer 21

La coupe est fait à l’ultramicrotome

Question 22

Qu’implique l’étape de la coloration?

Answer 22

Les coupes ultra mince sont coloré avec des métaux lourds afin de créer un contraste lors de leur exposition aux faisceaux d’électron du microscope électronique.

Question 23

Pour quoi le prix Nobel de chimie a été octroyé en 2017?

Answer 23

CRUO-EM et TOMOGRAPHIE

Question 24

Qu’est-ce que le CRYO-EM?

Answer 24

La création d’un disque vitrifié contenant des particules virale au moyen d’un mesh et d’azote liquide

Question 25

Qu’est-ce que la TOMOGRAPHIE?

Answer 25

L’utilisation d’un logiciel permettant d’analyser le positionnement de plusieurs virions de même structure, mais d’orientation différentes et d’en créer une image haute résolution en 3 dimensions.