Séance 4 Expérience 2

Question 1

Qu’est-ce qu’une culture primaire?

Answer 1

cellules issues de la mise en culture d’un fragment de tissu provenant directement d’un animal

Question 2

Qu’est-ce qu’une culture secondaire

Answer 2

les cellules sous-cultivées à partir d’une culture primaire

Question 3

À partir de quoi obtient-on une culture primaire?

Answer 3

À partir de tissus d’organismes adultes ou embryonnaires.

Question 4

Comment sont séparées le plus souvent les cellules d’un tissu avant d’être placées dans un milieu adéquat, où elles se multiplieront en couche monocellulaire à la surface du récipient, jusqu’à confluence?

Answer 4

Par l’action d’une enzyme.

Question 5

Qu’est-ce que la confluence?

Answer 5

La cessation de la multiplication cellulaire due à l’inhibition de contact.

Question 6

Quelle morphologie ont les cellules épithéliales?

Answer 6

polygonale

Question 7

Dans l’organisme, quelles cellules sont justaposées, disposées de façon continue en une ou plusieurs couches, formant une membrane protectrice à la surface des muqueuses?

Answer 7

Les cellules épithéliales.

Question 8

Que recouvrent l’ensemble des cellules (tissus) épithéliales?

Answer 8

Elles recouvrent la surface externe et les cavités internes de l’organisme.

Vers l’extérieur il s’agit de la peau et des muqueuses des orifices naturels.

Vers l’intérieur, ce sont les canités des voies respiratoires, du tube digestif, etc.

Question 9

Quelle morphologie ont les cellules fibroblastiques?

Answer 9

Fusiforme

Question 10

Quelles cellules sont des cellules jeunes, peu différenciées, précurseurs du tissu conjonctif?

Answer 10

Les cellules fibroblastiques.

Question 11

Où se situe le tissu conjonctif?

Answer 11

Il occupe les intervalles entre les organes ou les éléments d’un même organe.

Question 12

Quel rôle assure le tissus conjonctif?

Answer 12

Les rôles de lien, de remplissage, d’emballage et de soutien.
Rôle consiste aussi à protéger les organes qu’il entoure.

Question 13

Quel tissu est relativement solide et plus ou moins fibreux?

Answer 13

Le tissu conjonctif

Question 14

Quelles exigences nutritionnelles les milieux de culture utilisés pour la culture cellulaire doivent-ils satisfaire?

Answer 14

Ils doivent contenir de l’eau, des sels minéraux, du glucose, des a.a., des vitamines et des facteurs de croissance.

On peut y ajouter facultativement des antibiotiques et/ou des antifongiques, pour prévenir les contaminations.

Question 15

Sous quelles conditions cultive-t-on en général les cellules et pourquoi?

Answer 15

en tampon carbonate: sous une atmosphère d’air et de 5% de CO2, qui assure à la fois l’oxygénation de la culture et le maintien du pH.

Question 16

Quelles précautions doit-on prendre en culture cellulaire?

Answer 16

Tous les milieux doivent être stérilisés par filtration et contrôlés par des tests.

Toutes les manipulations devraient être effectuées sous une enceinte de sécurité biologique.

Toutes la verrerie servant à la culture cellulaire doit être strictement stérile et très propre (pas de trace de détergent ni d’endotoxine)

Question 17

Que doit-on se rappeler en virologie?

Answer 17

On veut étudier l’effet d’un virus sur une culture cellulaire, et non de bactéries ou de mycoplasmes.

Question 18

À quoi sert le sérum de veau foetal? (2)

Answer 18

1) Dans cette expérience, il sert également à inactiver la trypsine car le sérum contient des inhibiteur de la sérine: l’inhibiteur sérique de la trypsine. De plus, puisque le sérum contient également beaucoup de protéines, ceci “dilue” en quelque sorte la trypsine en lui fournissant beaucoup plus de cible à digérer, ça va essentiellement arrêter l’action de la trypsine.
2) De source de facteurs de croissance pour la mise en culture des cellules isolées.

Question 19

À quoi sert le bleu de trypan?

Answer 19

À faire la numération cellulaire. Les cellules blanche sont vivante, les bleus son mortes.

Question 20

À quoi sert la trypsine?

Answer 20

À rompre les liens peptidiques des protéines afin de les digérer en petits morceaux. Dans le cas de cette expérience, la trypsine sert à rompre les liens des protéines de la matrice extra-cellulaire qui permettent au cellules d’adhérer les unes aux autres et au support de plastique.

Question 21

Le milieu de culture contient les éléments suivants:
glucose, rouge de phénol, antifongique et antibactérien. À quoi servent-ils?

Answer 21

1) glucose: comme source d’énergie
2) Rouge de phénol: comme indicateur de pH
3) antifongique et antibactérien: pour contrecarrer toute contamination possible par des fungi ou des bactéries

Question 22

Pourquoi incubé les culture sous une atmosphère d’air et de 5% de CO₂?

Answer 22

Pour que le milieu de culture maintienne son niveau de pH par les échange gazeux carbonate/bicarbonate car c’est le tampon physiologique du sang, du sérum, comme l’eau de mer, d’où nous avons tous évolué. Ainsi dans ces conditions, le rouge de phénol reste rouge au lieu de devenir violet lorsqu’en absence d’échange carbonate/bicarbonate.

Question 23

Pourquoi est-il important d’avoir un compte spécifique, ni trop, ni trop peu, de cellules viable pour faire une culture cellulaire?

Answer 23

Puisque toutes les cellules, sauf les cellules circulantes, se divise seulement sur une surface, il est important qu’elles puissent adhérer à la surface du flacon, qui est traité afin de faciliter l’attachement des cellules à celui-ci.

Trop de cellule pourraient inhiber la croissance des cellules sur le support puisqu’elles arrêtent de croître lorsqu’elles se touchent.

Trop peu de cellules et la culture prendra trop de temps à être à tapisser le pétri.