Numération cellulaire

Question 1

Vous avez 10mL d’une suspension cellulaire dont la concentration vous est inconnue. Vous mélandez 0,4mL de cette suspension avec 0,4mL de bleu de trypan et procédez à une numération cellulaire à l’aide d’un hématimètre. Après avoir compté 8 sections carrées (chaque section ayant 1mm de côté et une épaisseur de 0,1mm), vous obtenez 600 cellules incolores. Quel volume de la suspension originale devrez-vous utiliser pour ensemencer, à raison de 6^_x10⁴ cellules viables/mL, un flacon de 75cm² devant contenir 25mL de milieu de culture?

Answer 1

1 mL

Question 2

Vous utilisez 1mL de trypsine afin de détacher les cellules d’un flacon de culture de 25cm². Vous ajoutez ensuite 3mL de milieu de culture aux cellules détachées. Vous mélangez 0,3mL de cette suspension avec 0,3mL e PBS et 0,3mL de bleu de trypan. Vous procédez à une numération cellulaire, sur ce mélange, à l’aide d’un hématimètre. Après avoir compté 2 sections carrées (chaque section ayant 1mm de côté et une épaisseur de 0,1mm), vous obtenez un total de 200 cellules incolores et 10 cellules bleues. a) Quel volume de la suspension cellulaire utiliserez-vous pour ensemencer 1,5^x10⁶ cellules viables dans un flacon de 75cm² devant contenir un volume final de 25mL de milieu de culture? b) Quel était le nombre total de cellules dans le flacon de 25cm² avant trypsinisation?

Answer 2

a) 0,5mL
b) 1,26^x10⁷ cellules

Question 3

Équation de numération cellulaire

Answer 3

Nb de c par mL = M^x10 000^xX

où M: nb total de c ÷ nb de sections comptées

10 000: parce qu’une section correspons à 1/10 000 de mL

X (facteur de dilution): parce que la suspension a été diluée 1:X.

(exemple: 1:5 = 0,1mL de la suspension + 0,4mL de bleu de trypan, car suspension:liquide total)

Question 4

Le bleu de trypan colore quelles cellules?

Answer 4

Les cellules mortes, les vivantes restent blanches.

Question 5

Pourquoi les érithrocytes sont-elles facile à différencier?

Answer 5

Car elles sont ovoïdes