Regulation der Genexpression regulierbare Systeme Flashcards
Was ist die Zusammenfassung der VL?
◼ Geregelte Systeme können in reversible und irreversible Systeme unterteilt werden
◼ Das Cre-Lox-Rekombinasesystem ist das am häufigsten verwendete irreversible System
◼ Die am häufigsten verwendeten reversiblen Systeme sind das Tet-System, das Ecdysone-System, das Dimerizer-System und das HBD-Domänen-regulierte System
◼ Reversible Systeme benötigen Induktor-Medikamente zur Aktivierung/Deaktivierung
gentechnisch veränderte Transaktivator/Transrepressor-Proteine
◼ Es gibt mehrere Varianten der Systeme
Was sind regulierbare System für die Genexpression?
Künstliche Systeme, welche es ermöglichen, die Expression eines Gens von außen zu steuern
Wo werden regulierbare System angewendet?
❑ Experimentelle Forschung aller Bereiche
❑ Generierung von K.o. und transgenen Mäusen
❑ Stabile Zelllinien mit induzierbarer Genexpression
❑ Virale Vektorsysteme, bei denen Gene an- und
abgeschaltet werden (Sicherheit der Gentherapie)
Was ist der Unterschied zwischen (A) irreversieblen Systemen und (B) reversiblen Systemen?
(A) produzieren einen permanenten
Phänotyp
◼ Cre-Lox-System
◼ FLP-Recombinase System
(B) An- und Abschalten möglich
z.B. Tet-System
Was macht as irreversible System Cre-loxP und woraus stammt es ursprünglich?
◼ Cre Recombinase erkennt loxP Orte
◼ schneidet die DNA zwischen zwei loxP Orten heraus
◼ Fügt die DNA wieder zusammen
◼ System stammt ursprünglich aus dem Bakteriophagen 1
Was sind die 4 Drug-regulatable Systems?
◼ Dimerizer/Rapamycin regulierbares System
◼ HBD-basiertes regulierbares System
◼ Ecdyson-regulierbares System
◼ Tetracyclin/Doxycyclin regulierbares System
Was ist das Prinzip vom Dimerizer-regulated System?
Inducer Drug ist ein kleines Molekül, welches an unterschiedliche Polypeptide gleichzeitig binden kann
Was ist das Prinzip des HBD-based regulated System?
Ein Fusionsprotein, welches eine DNA-bindende, eine Hormon-bindende Domäne (HBD) und eine Aktivatordomäne hat, wird durch die Bindung eines kleinen Moleküls an die HBD aktiviert
Was ist das Prinzip des Ecdyson-regulated System?
ein modifiziertes von Insekten stammendes Ekdysonrezeptorfusionsprotein dimerisiert mit einem Retinoid x Rezeptor (RXR) in Gegenwart des Insektenhormons Ekdyson
Was ist das Prinzip des Tetracyclin-regulierbaren Systems?
❑ Grundlage ist ein (Fusions)-Protein, welches eine DNA bindende, mittels Tetracyclin/Doxycycline aktivierbare Tet-Repressor (TetR) Domäne enthält.
❑ Der tetR bindet in Abhängigkeit von der Anwesenheit/Abwesenheit des Inducers an spezifische DNA Sequenzen
Was sind wichtige Komponenten des Tee-Systems?
◼ TetR - Tetracyclin Repressor: Protein von E. coli, welches an das Tn10 tetracycline (Tc) resistance operon in Abwesenheit von Tetracyclin bindet
◼ tTA – tetracycline controlled transactivator:
❑ Ein chimerisches Fusionsprotein aus dem C-Terminus des tetR dem C-terminus des HSV VP16
❑ in Abwesenheit von Dox: Bindung des tTA an spezifische Response Elemente (TRE) der DNA
◼ rtTA – reverse tTA: Mutierter tTA
❑ In Anwesenheit von Dox Bindung an TRE
◼ tTS –Tetracyclin Controled Transciptional Silencer
❑ Fusionsprotein aus tetR und KRAB (Suppressordomäne)
◼ TetO – Tn10 tetracycline resistance operon von E. coli
◼ TRE – Tetracycline Response Element (TRE)
❑ Besteht aus der TetO Sequenz (7 tandem repeats) und einem minimalen CMV-Promotor
Was ist das Tet-OFF System?
- Dox: tTA bindet an TRE und aktiviert die Genexpression
+ Dox: tTA kann nicht an TRE binden. Keine Genexpression
Was ist das Tet-ON System?
+ Dox: rtTA bindet an TRE und aktiviert die Genexpression
- Dox: rtTA kann nicht an TRE binden. Keine Genexpression
Was ist Dox?
Doxycycline; Antibiotikum
